[發(fā)明專利]一種抗壞血酸的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811435210.8
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109211821A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設計）人: 孫紫玥;劉金水
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產(chǎn)權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

本發(fā)明提供了一種抗壞血酸的檢測方法，檢測方法為：Ce(IV)離子能夠使3,3′,5,5′?四甲基聯(lián)苯胺(TMB)發(fā)生氧化反應生成藍色的TMB亞胺鹽，當向Ce(IV)/TMB體系中加入微量抗壞血酸時，抗壞血酸與TMB亞胺鹽發(fā)生還原反應，使體系藍色變淺，且變淺的程度與抗壞血酸的濃度有成正比，構建線性關系，實現(xiàn)對抗壞血酸的檢測。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明方法操作簡單，能快速實時的對抗壞血酸的濃度進行檢測。而且，檢測限低，對于抗壞血酸的檢測限可低至0.08μM，并且，檢測方法具有很好的選擇性和抗干擾性。

技術領域

本發(fā)明屬于檢測領域，具體涉及一種抗壞血酸的檢測方法。

背景技術

抗壞血酸即維生素C，其廣泛存在于水果、蔬菜、飲料、藥物及人體中，是維持機體正常生理功能的重要維生素之一，但人體不能自身合成,只能從外界攝取，因此，開發(fā)設計一種可以檢測低濃度抗壞血酸的方法具有重要的理論價值和應用價值。

目前，抗壞血酸的主要檢測方法有催化動力學法、分光光度法、色譜法、毛細管電泳法、酶方法、熒光法等。其中，酶方法對實驗條件的要求過高，酶的穩(wěn)定性對于實驗結果影響較大；氣相色譜法不能直接用于檢測抗壞血酸，所需的前期處理工作過于繁瑣，且操作復雜。而分光光度法所需儀器價格便宜且操作簡便。因此開發(fā)一種新的分光光度法檢測抗壞血酸具有很重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種抗壞血酸的檢測方法，將3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液和硫酸高鈰溶液混合，由于Ce(IV)的氧化作用，使3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)發(fā)生氧化反應立刻生成藍色的TMB亞胺鹽，使體系顏色從無色變?yōu)樗{色。然后，再往該體系中加入一定量的抗壞血酸，由于抗壞血酸的還原作用，使體系的TMB亞胺鹽發(fā)生還原反應立刻生成無色的3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)。因此隨著抗壞血酸濃度的增加，體系藍色逐漸變淺，在一定的濃度范圍內(nèi)，體系藍色變淺的程度與抗壞血酸的濃度有成正比，據(jù)此建立了一種檢測抗壞血酸的方法。該方法操作簡單，能快速實時的對抗壞血酸的濃度進行檢測。

本發(fā)明具體技術方案如下：

一種抗壞血酸的檢測方法，包括以下步驟：

將3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺溶液和Ce(IV)溶液混勻反應，再分別加入不同量的抗壞血酸溶液，然后調(diào)節(jié)體系pH，最后分別測量吸光度，構建吸光度與抗壞血酸濃度的線性關系，利用此線性關系檢測未知濃度的抗壞血酸。

所述檢測方法在22-27℃條件下進行。

進一步的，檢測體系中Ce(IV)終濃度為53.33μM，3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺終濃度為13.3-106.7μM，優(yōu)選為80μM。

進一步的，調(diào)節(jié)體系pH至3.0-6.7，優(yōu)選的調(diào)節(jié)pH至5。

檢測體系中，抗壞血酸終濃度分別為0μM、1.665μM、3.33μM、5μM、6.67μM、8.83μM、10μM和11.67μM。

進一步的，檢測是的吸收波長在654nm處的吸光強度。

構建的線性關系為：線性方程A＝0.447-50.0237C且線性相關系數(shù)R²為-0.998。

優(yōu)選的，具體檢測方法為：

將240μL 0.5mM的3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺溶液和80μL 1mM的Ce(IV)溶液混勻反應，體系變藍色，再分別加入不同量的抗壞血酸溶液，然后各加入80μL 0.1M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液調(diào)至PH＝5，再加入去離子水定容至1.5mL，最后，使用紫外可見分光光度計測量654nm處的吸光度，構建吸光度與抗壞血酸濃度的線性關系，利用此線性關系檢測未知濃度的抗壞血酸。