[發(fā)明專利]一種麥盧卡蜂蜜的鑒別方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811434717.1
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109270182A
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴(yán)麗娟;徐敦明;賴國銀;薛曉鋒;張潔;林立毅;張志剛;張峰
• 申請（專利權(quán)）人: 海峽兩岸農(nóng)產(chǎn)品檢驗檢疫技術(shù)廈門中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 劉小勤

1.一種麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，包括以下步驟：

步驟A1：收集麥盧卡商品化樣本作為麥盧卡蜂蜜樣本集S1；

步驟A2：收集不同種類的國產(chǎn)蜂蜜作為非麥盧卡蜂蜜樣本集S2；

步驟A3：將麥盧卡蜂蜜樣本集S1中的樣本和非麥盧卡蜂蜜樣本集S2中的樣本進(jìn)行前處理，提取小分子代謝物，并分別利用液相色譜/高分辨質(zhì)譜采集代謝組數(shù)據(jù)；

步驟A4：對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，導(dǎo)入文件后進(jìn)行峰提取、峰對齊、未知物的檢測、未知物的分組、未知物組成預(yù)測和搜庫，通過分析序列中質(zhì)控樣品的基峰離子色譜圖，確保儀器保留時間和離子強(qiáng)度的重現(xiàn)性；在數(shù)據(jù)可靠的情況下，進(jìn)行Loess QC矯正減小儀器長時間進(jìn)樣導(dǎo)致的保留時間漂移和信號衰減，同時計算質(zhì)控樣品中代謝特征峰RSD值，去除其中RSD大于20％的特征峰，將離子對數(shù)據(jù)表導(dǎo)入到Simca-p軟件，基于經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化處理的純麥盧卡蜂蜜樣本的強(qiáng)度積分相對數(shù)據(jù)矩陣與類別變量進(jìn)行PLS-DA回歸建模，得到鑒別模型；

步驟A5：測定未知樣本的液相色譜/高分辨質(zhì)譜代謝組數(shù)據(jù)，并將該數(shù)據(jù)代入已建立的鑒別模型，判定未知樣本是否為麥盧卡蜂蜜：若未知樣本符合已建立的鑒別模型，則判定為麥盧卡蜂蜜；否則，判定為非麥盧卡蜂蜜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：所述步驟A3中樣本進(jìn)行前處理的方法包括樣本溶解、除雜以及檢測樣本制備。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：所述前處理的方法包括：稱取融化的蜂蜜樣本于10mL離心管中，加入HCl溶液定容至10mL，渦旋混合至蜂蜜樣本完全溶解，高速離心，分取5mL上清液過固相萃取柱，用3mL水淋洗，再用3mL甲醇洗脫，經(jīng)過離心濃縮儀濃縮后，用重溶液重新溶解。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：蜂蜜樣本融化的方法為：對無結(jié)晶的蜂蜜樣本，直接將其攪拌均勻備用；對有結(jié)晶的蜂蜜樣本，在密閉情況下，水浴溫?zé)幔袷?，待樣本全部融化后攪勻，迅速冷卻至室溫。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：所述蜂蜜樣本的質(zhì)量為1.8-2.2克；

任選的，所述HCl溶液的摩爾濃度為0.01-0.02mol/L，或者pH值為1.9-2.1；

任選的，所述高速離心的轉(zhuǎn)速為10000-120000rpm，離心時間為10-20min；

任選的，所述固相萃取柱型號為Waters Prime HLB，60mg，3mL；

任選的，所述離心濃縮儀濃縮的倍數(shù)為5-10倍；

任選的，所述重溶液為0.1重量％甲酸的水溶液和乙腈的混合溶液，其中甲酸的水溶液與乙腈的體積比＝7/3。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：所述水浴溫?zé)岬臏囟葹?0-50℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：所述步驟A3中液相色譜/高分辨質(zhì)譜的分析條件包括：采用液相色譜和高分辨質(zhì)譜儀聯(lián)用系統(tǒng)，在質(zhì)譜的正離子和負(fù)離子兩種掃描模式下，獲得完整的代謝指紋譜，以保證最終結(jié)果的完整性和準(zhǔn)確性。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的麥盧卡蜂蜜的鑒別方法，其特征在于：所述液相色譜的分析條件包括：HSS T3色譜柱，1.8μm，2.1mm i.d.×100mm；進(jìn)樣體積為10μL；柱溫50℃，流動相：A為0.1重量％甲酸的水溶液，B為含0.1重量％甲酸的甲醇溶液，流速0.4mL/min；流動相洗脫梯度為：初始流動相為100體積％A，2分鐘內(nèi)流動相A梯度下降至65體積％，18分鐘時流動相A降低至0％，并保持2分鐘，22分鐘A相升至100體積％；

所述高分辨質(zhì)譜的分析條件包括：電噴霧離子源，質(zhì)譜掃描范圍為100-1000m/z，分別在正、負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，F(xiàn)ull MS分辨率17500，數(shù)據(jù)采集模式為centroid mode；使用氮氣作為載氣，正離子和負(fù)離子模式下噴針電壓分為3500V和3500V；鞘氣流量50L/min，輔氣體積流量12.5L/min；輔氣溫度320℃。