[發(fā)明專利]檢測加熱不燃燒卷煙總粒相物對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811433473.5
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109580957A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 管瑩;李雪梅;徐玉瓊;湯建國;朱東來;張霞;韓敬美;何東沅;張偉;高茜
• 申請（專利權(quán)）人: 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/02
• 代理公司: 北京市領(lǐng)專知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11590
• 代理人: 任文娟;陳有業(yè)

本發(fā)明公開檢測加熱不燃燒卷煙總粒相物對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響方法，包括以下步驟：(1)樣品前處理；(2)人鼻腔上皮細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的制備；(3)人鼻腔上皮細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞濃度計算；(4)人鼻腔上皮細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的接種；(5)受試物暴露；(6)受試物孵育品的收集；(7)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；(8)加樣；(9)加入抗體；(10)洗板、加酶；(11)洗板、顯色；(12)測量吸光值；(13)細(xì)胞炎癥因子分泌量測定。本發(fā)明樣品的有效處理、檢測劑量的優(yōu)化設(shè)定以及靶細(xì)胞的正確選擇，使得本方法能夠準(zhǔn)確檢測加熱不燃燒卷煙總粒相物對細(xì)胞炎癥因子分泌量的影響。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于煙草制品的安全性生物學(xué)效應(yīng)評價技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及檢測加熱不燃燒卷煙總粒相物對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響方法。

背景技術(shù)

隨著人們對健康的關(guān)注越來越高，對煙草產(chǎn)品提出了更高的要求，不但要有較好的口感，而且要盡可能的減少人體的不良感受。加熱不燃燒卷煙制品避免了傳統(tǒng)卷煙制品燃燒所產(chǎn)生的復(fù)雜混合物所帶來的危害，現(xiàn)階段已成為國外煙草公司從傳統(tǒng)卷煙制品轉(zhuǎn)向的新方向之一。

加熱非燃燒型卷煙，其特征在于加熱煙草而非燃燒煙草，向消費者提供一定的煙草特征感受。加熱不燃燒卷煙制品研發(fā)人員在產(chǎn)品配方設(shè)計初期，將不同組份按照不同比例組合調(diào)配，形成具有不同風(fēng)格的初選配方，再結(jié)合化學(xué)評價和感官評價對配方進(jìn)行不斷篩選調(diào)整后形成最終的產(chǎn)品配方。然而初選配方數(shù)量眾多，全部進(jìn)行感官評價耗時耗力，且感官評價側(cè)重于對產(chǎn)品的風(fēng)格口感進(jìn)行篩選，如何利用生物學(xué)測試技術(shù)對產(chǎn)品初選配方進(jìn)篩選，以獲得降低人體不良感受的產(chǎn)品配方，目前尚屬探索階段，并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法。

檢測對象的改變導(dǎo)致樣品的前處理方法、檢測用細(xì)胞、檢測劑量等出現(xiàn)很大差異，這些差異會對試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生較大影響，現(xiàn)有的用于檢測卷煙煙氣對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響的方法已經(jīng)不能滿足加熱不燃燒卷煙制品對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響的檢測需要。目前，國內(nèi)外研究機(jī)構(gòu)及煙草公司尚未有針對加熱不燃燒卷煙制品對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測加熱不燃燒卷煙總粒相物對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響的方法，其以加熱不燃燒卷煙總粒相物作為檢測基礎(chǔ)，為準(zhǔn)確評價加熱不燃燒卷煙制品對安全性評估提供有效測定方法。

除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為體積百分?jǐn)?shù)。

本發(fā)明中所使用的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基購買于市場任何可購買到的商品公司。

檢測加熱不燃燒卷煙總粒相物對細(xì)胞炎癥因子分泌量影響方法，包括以下步驟：

(1)樣品前處理：采用直線型吸煙機(jī)，在抽吸容量為55.0mL，持續(xù)時間3s，抽吸頻率為30s的抽吸條件下，連續(xù)抽吸10口，用直徑為44mm的劍橋濾片捕集，分別于抽吸前、抽吸后稱量煙氣捕集器的質(zhì)量，按照公式(1)計算加熱不燃燒卷煙總粒相物的質(zhì)量mTPM；

mTPM＝m₁-m₀ (1)

式中：

m₀——抽吸前煙氣捕集器的質(zhì)量，單位為毫克(mg)；

m₁——抽吸后煙氣捕集器的質(zhì)量，單位為毫克(mg)；

捕集完畢后，將捕集后的劍橋濾片放入50mL的三角瓶中，加入二甲基亞砜，使加熱不燃燒卷煙總粒相物在二甲基亞砜中的濃度為40mg/mL；將此三角瓶置于超聲儀上超聲30min；再用無菌濾紙過濾收集二甲基亞砜萃取液，分裝至1mL 的凍存管中，-80℃保存待用；