[發(fā)明專(zhuān)利]植物乳桿菌菌株的鑒定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811427912.1
• 申請(qǐng)日: 2018-11-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109266771A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張紅發(fā);劉振民;游春蘋(píng);扶曉菲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 光明乳業(yè)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/25
• 代理公司: 北京東正專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 11312
• 代理人: 蔡仲德

1.一種植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)提取待測(cè)菌株基因組DNA，雙酶切基因組DNA，得到酶切后的基因片段；

(2)選取pMD18-T質(zhì)粒載體，雙酶切后，得到酶切后的質(zhì)粒；

(3)將酶切后的基因片段與酶切后的質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化，克隆，測(cè)序，獲得至少7條序列；

(4)將獲得的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，每條序列對(duì)應(yīng)多個(gè)同源性高的菌株，如果任意7條序列對(duì)應(yīng)的共有菌株僅為植物乳桿菌，就鑒定待測(cè)菌株為植物乳桿菌菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，將待測(cè)菌株劃線培養(yǎng)后獲得單菌落，挑取單菌落經(jīng)純培養(yǎng)離心收集菌體，液氮粉碎菌體后提取基因組DNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，雙酶切所用的酶為PstI內(nèi)切酶和BamH內(nèi)切酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，雙酶切后，將酶滅活，然后過(guò)柱純化。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，在氨芐抗性LB平板上，挑取載體pMD18-T自連質(zhì)粒，然后進(jìn)行液體擴(kuò)培。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，使用依賴于ATP的線性DNA分解酶純化質(zhì)粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，酶切后的基因片段與酶切后的質(zhì)粒使用T4DNA連接酶進(jìn)行連接。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞，使用氨芐青霉素進(jìn)行抗性篩選。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，將轉(zhuǎn)化子抽提質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，將鑒定為陽(yáng)性的轉(zhuǎn)化子送樣測(cè)序。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌菌株的鑒定方法，其特征在于，步驟(4)中，將獲得的序列在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行比對(duì)分析。