[發明專利]一種黃芪中二硫鍵多肽的純化和鑒定方法

有效

• 申請號: 201811422418.6
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN111217889B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 張曉哲;何枚羲
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C07K1/14
• 代理公司: 北京元周律知識產權代理有限公司 11540
• 代理人: 周游

1.一種黃芪中二硫鍵多肽的純化和鑒定方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步驟：

a）制備黃芪提取液；

b）向所述黃芪提取液中加入萃取劑A，得到含有萃取劑A的萃取液和不含萃取劑A的萃取液；

c）向所述不含萃取劑A的萃取液中加入醇類萃取劑B，得到含有醇類萃取劑B的萃取液和不含醇類萃取劑B的萃取液；

d）將所述含有醇類萃取劑B的萃取液濃縮制得干燥物I, 所述干燥物I采用去離子水混懸形成含有干燥物I的溶液，所述含有干燥物I的溶液與混合萃取液C接觸萃取，將形成的中間沉淀層濃縮制得干燥物II；

e）將所述干燥物II分成兩等份干燥物II-1和干燥物II-2；

f）將溶解有所述干燥物II-2的尿素溶液與二硫蘇糖醇混合反應，制得前驅體1；

g）將所述前驅體1與碘乙酰胺接觸，進行烷基化反應得到前驅體2；

h）向所述前驅體2中加入二硫蘇糖醇，反應結束后除鹽并進行干燥，得到干燥物III；

i)采用質譜技術對所述干燥物II-1和所述干燥物III進行多肽檢測分析；

其中，

所述黃芪提取液是固體黃芪樣品的乙醇-水溶液，其中乙醇在所述乙醇-水溶液中的體積比為70%；

所述固體黃芪樣品由粉碎黃芪切片獲得；

所述固體黃芪樣品與乙醇-水溶液的質量體積比為0.125kg/L；

所述萃取劑A選自乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷中的至少一種；

所述醇類萃取劑B為正丁醇；

所述混合萃取液C由正丁醇和二氯甲烷組成；

所述萃取劑A與所述黃芪提取液的體積比為1:1；

所述醇類萃取劑B與所述不含萃取劑A的萃取液的體積比為1:1；

所述混合萃取液C中的正丁醇與二氯甲烷的體積為：4~5:1。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述干燥物II-1的質譜數據用作所述干燥物III的二硫鍵的烷基化多肽質譜數據的內在對照。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合萃取液C與所述含有干燥物I的溶液的體積比為1:4。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟f）中，溶解有所述干燥物II-2的尿素溶液與二硫蘇糖醇混合反應在50~60℃下進行0.5~1.5小時。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟f）中，所述溶解有所述干燥物II-2的尿素溶液與二硫蘇糖醇混合反應在水浴條件下進行。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟g）中，所述前驅體1與碘乙酰胺接觸反應在常溫下進行3~5小時。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟h）中，所述前驅體2中加入二硫蘇糖醇，反應在常溫下進行0.5~1.5小時。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述質譜技術包括Nano-LTQ-OrbitrapLC-MS/MS或Q-TOF LC-MS/MS中至少一種。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述質譜技術是Nano-LTQ-Orbitrap LC-MS/MS。