[發明專利]用于光漂白染色細胞的方法

在審

• 申請號: 201811417890.0
• 申請日: 2018-11-26
• 公開（公告）號: CN109959641A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: J.福爾巴赫;C.多澤;T.羅克爾;V.魯道夫
• 申請（專利權）人: 美天施生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;萬雪松

1. 一種用于檢測生物樣本的樣品中的靶部分的方法，其通過以下進行：

a) 提供至少一種具有通式(I) X_n – P – Y_m的綴合物，其中X是熒光部分，Y是抗原識別部分，n、m是在1和100之間的整數，P是包含根據通式I的聚乙二醇的間隔基

(R₇CH₂CHR₅O)-(CR₁R₂CR₃R₄O)_o-(CH₂CHR₆R₈) (I)

其中R₁至R₈獨立地為H或具有至少1個且最大20000個重復單元的乙二醇的支鏈或直鏈低聚物或與Y或X的共價鍵，條件是R₁至R₈中的至少兩個是與Y或X的共價鍵

且o是1-500的整數；

b) 使生物樣本的樣品與至少一種綴合物接觸，從而用綴合物標記被抗原識別部分Y識別的靶部分；

c) 用波長在熒光部分X的吸收光譜內的光激發該標記的靶部分；

d) 通過檢測由熒光部分發射的熒光輻射來檢測該標記的靶部分；和

e) 通過用波長在熒光部分X的吸收光譜內的光輻射綴合物，持續足以傳遞足夠的能量以將由熒光部分發射的熒光輻射降低初始熒光輻射的至少75％的時間，來降解該標記的靶部分的熒光部分X。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述綴合物是根據通式II的化合物：

其中Z =至少一個熒光部分X和至少一個抗原識別部分Y；p是2至500的整數。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述綴合物是根據通式III的化合物：

其中Z =至少一個熒光部分X和至少一個抗原識別部分Y；p是2至500的整數。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于熒光部分X選自呫噸染料、羅丹明染料、香豆素染料、花青染料、芘染料、噁嗪染料、吡啶基噁唑染料和吡咯亞甲基染料。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于熒光部分X被一種或多種賦予水溶性的取代基取代，所述賦予水溶性的取代基選自磺酸酯、膦酸酯、磷酸酯、磺酰胺、聚醚和碳酸酯。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于抗原識別部分Y是至少一種選自免疫球蛋白、抗體、片段化抗體、Fab、Fab'、F(ab')₂、sdAb、scFv、di-scFv的生物分子，各自具有天然或重組來源。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于抗原識別部分Y是至少一種選自肽/MHC-復合物、細胞粘附或共刺激分子的受體、受體配體、抗原、半抗原結合劑、抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白、適配子、引物和連接酶底物的生物分子。

8.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于抗原識別部分Y是抗體、片段化抗體、片段化抗體衍生物、靶向TCR分子的肽/MHC-復合物、細胞粘附受體分子、共刺激分子的受體或人工工程化結合分子。

9.根據權利要求1-8中任一項所述的方法，其特征在于通過提供至少兩種綴合物重復步驟a)-d)，其中每種抗原識別部分Y識別不同的抗原。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其特征在于在步驟e)中標記的靶部分的熒光部分X通過添加氧化劑進一步降解。

11.根據權利要求1-10中任一項所述的方法在熒光顯微術、流式細胞術、熒光分光光度法、細胞分離、病理學或組織學中的用途。