[發(fā)明專利]一種淚腺干細胞、淚腺干細胞的培養(yǎng)體系和培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811415998.6
• 申請日: 2018-11-26
• 公開（公告）號: CN109486766B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 張雁;肖灑
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 李小林;李海恬

1.一種淚腺干細胞的培養(yǎng)體系，其特征在于，以DMEM/F12為基礎培養(yǎng)基，添加以下組分構成培養(yǎng)液：細胞培養(yǎng)添加劑、非必需氨基酸、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、絲裂原激活蛋白激酶/細胞外信號調節(jié)激酶信號通路配體、成纖維細胞生長因子、Wnt信號通路配體和ROCK信號通路抑制劑的組合物，并以基質膠作為立體培養(yǎng)的支架；

所述細胞培養(yǎng)添加劑為N2和B27的混合物；或，所述細胞培養(yǎng)添加劑為9F，所述9F為β-巰基乙醇、2-氨基乙醇、亞硒酸鈉、肝素、轉鐵蛋白、維生素C、胰島素、牛血清白蛋白-油酸和成纖維細胞生長因子-2的混合物；

所述絲裂原激活蛋白激酶/細胞外信號調節(jié)激酶信號通路配體為EGF，所述成纖維細胞生長因子為FGF10，所述Wnt信號通路配體為Wnt3A，所述ROCK信號通路抑制劑為Y-27632；

所述細胞培養(yǎng)添加劑中N2體積濃度為0.5％-1％，B27體積濃度為1％-2％；

所述細胞培養(yǎng)添加劑9F中各組分濃度為：β-巰基乙醇5-10μM、2-氨基乙醇5-10μM、亞硒酸鈉10-20μM、肝素50-150ng/ml、轉鐵蛋白2-5ng/ml、維生素C 5-10ng/ml、胰島素5-10ng/ml、牛血清白蛋白-油酸6.8-9.4ng/ml和成纖維細胞生長因子-2 5-10ng/ml；

所述非必需氨基酸濃度為1％，所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺濃度為1％；

所述EGF濃度為10-50ng/ml，FGF10濃度為10-100ng/ml，Wnt3A濃度為5-10ng/ml，Y-27632濃度為5-10mM。

2.根據權利要求1所述的淚腺干細胞的培養(yǎng)體系，其特征在于，所述基質膠為Matrigel。

3.一種淚腺干細胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，將小鼠淚腺組織消化成單細胞接種到基質膠中，待其凝固后，加入如權利要求1-2任一項所述淚腺干細胞培養(yǎng)液中，在37℃、5％～10％CO₂環(huán)境下進行培養(yǎng)。