[發明專利]一種拯救腮腺炎病毒的系統和方法

在審

• 申請號: 201811413631.0
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN111218473A
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 劉蘭軍;張勇俠;高雅麗;陳宗香;康莊
• 申請（專利權）人: 成都生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/45;C12N7/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明提供了一種制備腮腺炎病毒的系統及方法，它是通過構建帶有T7啟動子的腮腺炎病毒全長質粒，以及輔助質粒，通過反向遺傳學的方法制備腮腺炎病毒。所述輔助質粒有4種：NP質粒、P質粒、L質粒和T7RNAP質粒。其中T7RNAP質粒是帶有CMV啟動子和編碼T7聚合酶的DNA的序列。本發明可以有效制備具有較高免疫原性的腮腺炎病毒，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及病毒反向遺傳學領域，特別涉及一種拯救腮腺炎病毒的系統和方法。

背景技術

腮腺炎病毒(Mumps virus，MuV)屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)，腮腺炎病毒屬。基因組為不分節段的單股負鏈核糖核酸(RNA)，長度為15384bp。流行性腮腺炎(腮腺炎)是由腮腺炎病毒引起的急性傳染病，該病毒可廣泛累及各臟器，其臨床表現主要在腮腺、性腺和中樞神經系統，如無菌性腦膜炎、腦炎、睪丸炎、卵巢炎、胰腺炎等^[1]。

腮腺炎疫苗接種已有近50年歷史，國內外在用或使用過的腮腺炎減毒活疫苗株包括：中國S₇₉株、美國Jeryl Lynn株、日本Urabe Am9株、前蘇聯Leningrad-Zagreb株、瑞士Rubini株以及比利時RIT4385株^[2]。美國Jeryl Lynn疫苗株接種范圍最廣，由兩種亞株組成即主要成分JL1亞株和次要成分JL2亞株，比例為5∶1^[34]。我國大規模使用的腮腺炎疫苗S₇₉株是從Jeryl Lynn株減毒活疫苗中傳代獲得的，第3代工作種子批也含有兩個亞株JL1和JL2，比例為2∶5^[5]。GSK公司基于Jeryl Lynn株通過有限稀釋法分離獲得均一純化的JL1亞株用來開發疫苗，該疫苗株命名為RIT4385。有研究表明：默克公司Jeryl-Lynn株和GSK公司RIT4385株疫苗接種兒童抗體陽性率都達到了90％以上，免疫原性優于S₇₉株^[6-7]。Sueli L^[8]等對默克公司ProQuad^TM疫苗中腮腺炎病毒的主要組成成分JL1株和GSK公司的RIT4385株進行全基因組測序對比發現兩者序列完全相同。

通過有限稀釋法純化JL1亞株需連續稀釋至單克隆，并對稀釋單克隆進行測序等工作，需要耗費大量的人力及時間。

發明內容

為了獲得成分明確的腮腺炎病毒減毒株，以保證其疫苗產品的穩定性，本發明提供了一種拯救腮腺炎病毒的系統和方法。

首先，本發明提供了一種腮腺炎病毒拯救系統，它包括：全長質粒、NP質粒、P質粒、L質粒和T7RNAP質粒；

所述全長質粒是帶有T7啟動子序列、以及腮腺炎病毒基因組或反基因組的DNA序列的質粒；

所述NP質粒是帶有能編碼腮腺炎病毒核衣殼蛋白的DNA的質粒；

所述P質粒是帶有能編碼腮腺炎病毒磷蛋白的DNA的質粒；

所述L質粒是帶有能編碼腮腺炎病毒聚合酶蛋白的DNA的質粒；

所述T7RNAP質粒是帶有能編碼T7RNA聚合酶的DNA的質粒；

所述NP、P、L和T7RNAP質粒還分別帶有CMV啟動子序列。

進一步地，所述全長質粒中，腮腺炎病毒基因組序列3’端帶有丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)；腮腺炎病毒反基因組序列5’端帶有丁型肝炎病毒核酶序列的反向互補序列，所述丁型肝炎病毒核酶序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，所述腮腺炎病毒為8₇₉株、Jeryl Lynn株、Urabe Am9株、Leningrad-Zagreb株、Rubini株以及RIT4385株中的一種。