[發明專利]一種拯救腮腺炎病毒的系統和方法

在審

• 申請號: 201811413631.0
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN111218473A
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 劉蘭軍;張勇俠;高雅麗;陳宗香;康莊
• 申請（專利權）人: 成都生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/45;C12N7/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種腮腺炎病毒的拯救系統，其特征在于，它包括：全長質粒、NP質粒、P質粒、L質粒和T7RNAP質粒；

所述全長質粒是帶有T7啟動子序列、以及腮腺炎病毒基因組或反基因組的DNA序列的質粒；

所述NP質粒是帶有能編碼腮腺炎病毒核衣殼蛋白的DNA的質粒；

所述P質粒是帶有能編碼腮腺炎病毒磷蛋白的DNA的質粒；

所述L質粒是帶有能編碼腮腺炎病毒聚合酶蛋白的DNA的質粒；

所述T7RNAP質粒是帶有能編碼T7RNA聚合酶的DNA的質粒；

所述NP、P、L和T7RNAP質粒還分別帶有CMV啟動子序列。

2.如權利要求1所述的病毒拯救系統，其特征在于，所述全長質粒中，腮腺炎病毒基因組序列3’端帶有丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)；腮腺炎病毒反基因組序列5’端帶有丁型肝炎病毒核酶序列的反向互補序列，所述丁型肝炎病毒核酶序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如權利要求2所述的病毒拯救系統，其特征在于，所述腮腺炎病毒為S₇₉株、JerylLynn株、Urabe Am9株、Leningrad-Zagreb株、Rubini株以及RIT4385株中的一種。

4.如權利要求3所述的病毒拯救系統，其特征在于，所述腮腺炎病毒為Jeryl Lynn株的JL1亞株。

5.一種腮腺炎病毒拯救的方法，其特征在于，該方法包括：

(1)在培養基內的宿主細胞中使用權利要求1～4所述全長質粒、NP質粒、P質粒、L質粒和T7RNAP質粒進行轉染或轉化；所述轉染或轉化在足夠使所述拯救組合物共表達、并裝配成感染性病毒的條件下進行；

(2)培養細胞；

(3)收集病毒。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述全長質粒、NP質粒、P質粒、L質粒和T7RNAP質粒的質量比是：12:8:4:8:4。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為CEF、BHK、293T、BSR、CHO、MRC-5、WI-38、HEK 293、EB66和Vero細胞中的一種。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為Vero細胞。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為P150代內的Vero細胞。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，每5×10⁵個宿主細胞需要12μg的全長質粒。