[發明專利]一種從板藍根中提取分離新葡萄糖蕓苔素的方法

有效

• 申請號: 201811412805.1
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN111217874B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 程志紅;郭啟慧
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07H15/26
• 分類號: C07H15/26;C07H1/08
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種從板藍根中提取分離新葡萄糖蕓苔素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)粉碎：將板藍根藥材打粉；

(2)浸泡：向步驟(1)所得板藍根粉末中加入五倍體積的70％乙醇水溶液浸泡過夜；

(3)提取：將步驟(2)中板藍根的醇水溶液加熱回流提取2.5小時，過濾收集藥材提取液，藥渣中再次加入五倍體積70％乙醇水溶液浸泡12小時，再次加熱回流提取2.5小時，過濾收集藥材提取液，合并兩次所得提取液；

(4)富集：將步驟(3)中所得提取液用處理過的DEAE?SephadexA-25凝膠裝填的色譜柱進行富集分離，經過吸附平衡、洗脫、解吸，得富集液；

(5)脫鹽、濃縮：向步驟(4)中所得富集液中加入95％乙醇水，-4℃靜置30分鐘，離心得上清液，濃縮；

(6)分離：將步驟(5)所得總硫苷提取液用處理過的75C₁₈-OPN裝填的色譜柱進行富集分離，經過吸附平衡、洗脫、解吸，得新葡萄糖蕓苔素洗脫液，所述洗脫步驟采用的洗脫液為0.3M?K₂SO₄、水、20％甲醇水、甲醇；

(7)純化：將步驟(6)所得新葡萄糖蕓苔素洗脫液濃縮，用處理過的Sephadex?LH-20裝填的色譜柱進行純化，以甲醇為流動相洗脫得新葡萄糖蕓苔素洗脫液；

(8)濃縮冷凍干燥：將步驟(7)中所得新葡萄糖蕓苔素洗脫液濃縮至干，冷凍干燥得高純度新葡萄糖蕓苔素。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)中用到的分離硫苷的色譜柱填料是75C₁₈-OPN，洗脫方法為：用50g?75C₁₈-OPN裝填柱子，采用純水裝填，100ml?0.3M?K₂SO₄預處理，上樣質量為12g，吸附平衡時間為2～10分鐘，100ml?0.3M?K₂SO₄洗脫，時間為40分鐘，50ml純水洗脫，時間為20分鐘，100ml?20％甲醇水洗脫，時間為40分鐘，100ml甲醇洗脫，時間為40分鐘，其中用20％甲醇水洗脫得到的流份包含新葡萄糖蕓苔素。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中：向所得板藍根粉末中加入五倍體積的70％乙醇水溶液；

所述(3)提取中：將步驟(2)中板藍根的醇水溶液加熱回流提取2.5小時，過濾收集藥材提取液，藥渣中再次加入五倍體積70％乙醇水溶液浸泡12小時，再次加熱回流提取2.5h，過濾收集藥材提取液，合并兩次所得提取液；

所述步驟(5)中：向步驟(4)中所得富集液中加入兩倍體積95％乙醇水，-4℃靜置30分鐘，離心得上清液，50℃濃縮至原體積1/50～1/70。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，采用DEAE?Sephadex?A-25色譜柱：用DEAESephadexA-25凝膠裝填柱子，柱體積為500ml，用1000ml?0.5M?HOAc-NaOAc預處理后，上樣濃度為所得提取液的2倍，上樣體積為2L，吸附平衡時間為8～10小時，1000ml?70％乙醇洗脫，時間為80分鐘，3000mlAcOH/EtOH/H₂O(1：1：3)洗脫，時間為300分鐘，1000ml純水洗脫，時間80分鐘，最后，解吸液為5000ml?0.5M?K₂SO₄乙醇水溶液(乙醇：水＝1：19)，解吸液洗脫時間為600分鐘。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，采用Sephadex?LH-20為色譜填料：洗脫過程為，將所得新葡萄糖蕓苔素洗脫液40℃下濃縮至干，再加入2～3ml甲醇復溶，采用甲醇預處理后的柱體積500ml的Sephadex?LH-20裝填的柱子進行純化，每5ml一個流份，甲醇洗脫時間為12小時。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所獲的新葡萄糖蕓苔素其結構如下示：