[發明專利]一種細胞轉染的蛋白質載體

有效

• 申請號: 201811409738.8
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN109535321B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 余細勇;繆迎羚
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學
• 主分類號: C08F251/00
• 分類號: C08F251/00;C08F230/02;C12N5/00
• 代理公司: 北京英特普羅知識產權代理有限公司 11015
• 代理人: 齊永紅

1.一種細胞轉染的蛋白質載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將殼聚糖與鄰苯二甲酸酐分散于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，于氬氣氣氛下攪拌并加熱反應制備得到N-鄰苯二甲酰-殼聚糖(NP-Chi)；

(2)將步驟(1)中反應產物N-鄰苯二甲酰-殼聚糖溶于二甲基亞砜(DMSO)中，加入2-溴異丁酰溴和三乙胺，于室溫下攪拌反應得到N-鄰苯二甲酰-殼聚糖ATRP大分子引發劑(NP-Chi-Br)；

(3)將步驟(2)中反應產物NP-Chi-Br溶于N-甲基吡咯烷酮(NMP)中，加入肼一水合物(hydrazine monohydrate)溶液，在氬氣氣氛下攪拌并加熱反應得到殼聚糖ATRP大分子引發劑(Chi-Br)；

(4)將步驟(3)中產物Chi-Br和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰膽堿(MPC)溶于DMSO中，于氮氣保護下加入溴化亞銅(CuBr)和聯吡啶(bpy)，室溫下攪拌反應后得到產物殼聚糖與聚(2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰膽堿)接枝物(Chi-PMPC)。

2.根據權利要求1所述的細胞轉染蛋白質載體的制備方法，其特征在于，步驟(1)中殼聚糖與鄰苯二甲酸酐的質量比為1:2～5，DMF體積為20～80體積份，加熱溫度為110～130℃，反應時間4h～16h，反應完成后冷卻至室溫，倒入冰水中，抽濾得到沉淀并用冰甲醇徹底洗滌，干燥后得到N-鄰苯二甲酰-殼聚糖(NP-Chi)。

3.根據權利要求1所述的細胞轉染蛋白質載體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中NP-Chi在溶劑DMSO中的濃度為5.0質量份/20～80體積份，2-溴異丁酰溴1體積份，三乙胺1.1體積份，反應時間2～5d，反應完成后透析3～7d，過濾洗滌干燥后得黃色固體產物N-鄰苯二甲酰-殼聚糖ATRP大分子引發劑(NP-Chi-Br)。

4.根據權利要求1所述的細胞轉染蛋白質載體的制備方法，其特征在于，步驟(3)中NP-Chi-Br在溶劑NMP中的濃度為1.0質量份/10～30體積份，肼一水合物溶液的濃度為4mol/L，體積為10～30體積份，加熱溫度90～110℃，反應3～8h后倒入乙醇中沉淀，離心分離沉淀，用乙醇洗滌后凍干得到殼聚糖ATRP大分子引發劑(Chi-Br)。

5.根據權利要求1所述的細胞轉染蛋白質載體的制備方法，其特征在于，步驟(4)中Chi-Br與MPC的質量比為1:0.1～1，DMSO體積為20～50體積份，CuBr為0.05質量份，bpy為0.06質量份，反應16～48h后透析3～7d，凍干得產物殼聚糖與聚(2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰膽堿)接枝物(Chi-PMPC)。

6.一種細胞轉染的蛋白質載體，其特征在于，其由權利要求1至5任一項所述的細胞轉染蛋白質載體的制備方法制得。