[發明專利]一種原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法有效
| 申請號： | 201811409551.8 | 申請日： | 2018-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN109517043B | 公開（公告）日： | 2022-06-14 |
| 發明（設計）人： | 黃玲玲;盧晶晶;于佳平;張柳;董曉麗;姜海洋;徐坤;王力 | 申請（專利權）人： | 艾美誠信生物制藥有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/14 | 分類號： | C07K14/14;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 大連東方專利代理有限責任公司 21212 | 代理人： | 趙淑梅;李馨 |
| 地址： | 116600 遼寧省大連市中國（遼寧）自*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 重組 輪狀病毒 抗原 p2 vp8 純化 方法 | ||
1.一種原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法，其特征在于：所述純化方法包括菌體預處理的步驟、柱層析的步驟；
其中，所述柱層析的步驟為：
①先將預處理后的菌體采用強陰離子填料柱層析，獲得洗脫峰；
②再將步驟①所得洗脫峰采用羥基磷灰石填料柱層析，獲得穿透峰；
所述羥基磷灰石填料柱層析的條件為：將步驟①所得洗脫峰的pH值調節至7.0，上樣量為400mg蛋白質/100mL填料，采用20mM Tris-HCl+0.1M NaCl，pH7.0，沖洗，線性流速為100cm/h；
所述強陰離子填料柱層析的條件為：上樣量為500mg蛋白質/100mL填料，采用20mMTris-HCl+0.1M NaCl，pH7.5，洗脫，線性流速為100cm/h。
2.根據權利要求1所述原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法，其特征在于：所述羥基磷灰石填料柱的預處理方法為：先用0.5M NaOH清洗，再用純化水間隔后，然后用300mM PBS，pH7.0緩沖液再生，最后用20mM Tris-HCl+0.1M NaCl，pH7.0，平衡。
3.根據權利要求1所述原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法，其特征在于：所述柱層析步驟中強陰離子填料柱的預處理方法為：先用0.5M NaOH清洗，再用20mM Tris-HCl，pH7.5，平衡。
4.根據權利要求3所述原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法，其特征在于：所述菌體預處理的步驟包括發酵獲得菌體、重懸和破碎、超濾；
其中，所述超濾為：將重懸和破碎后獲得的胞漿上清通過100K中空纖維柱澄清。
5.根據權利要求4所述原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法，其特征在于：所述發酵獲得菌體為：利用大腸桿菌Rosetta(DE3)發酵誘導表達獲得P2-VP8的發酵液，離心，獲得菌體。
6.根據權利要求5所述原核表達重組輪狀病毒抗原P2-VP8的純化方法，其特征在于：所述重懸和破碎為：先用20mM Tris-HCl，pH7.5平衡液重懸菌體，再利用高壓勻漿器在50Hz，800-900psi下破碎菌體，12000r/min離心，獲得胞漿上清液。
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