[發(fā)明專利]一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因子復(fù)合物的制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811409240.1
• 申請(qǐng)日: 2018-11-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109316373A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張權(quán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京安溢生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K8/64
• 分類號(hào): A61K8/64;A61K8/99;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08;A61P17/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 趙麗娜

1.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因子復(fù)合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)；

換液，繼續(xù)培養(yǎng)，至細(xì)胞長(zhǎng)滿至85％-95％，收集培養(yǎng)液，得到含有大量臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的因子的培養(yǎng)液；

所述培養(yǎng)液過(guò)濾去除細(xì)胞碎片，得到含有所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因子復(fù)合物的液體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞選用P3-P7代中的任一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的組分均如下所示：

以無(wú)酚紅的α-MEM為基準(zhǔn)，添加以下組分：FBS體積百分?jǐn)?shù)為10％±2％，谷氨酰胺溶液體積百分?jǐn)?shù)為1％±0.05％，bFGF濃度為20±2ng/mL，EGF濃度為20±2ng/mL；

其中，所述谷氨酰胺溶液的濃度為200mM。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述貼壁培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中進(jìn)行，以T75培養(yǎng)瓶計(jì)，每個(gè)培養(yǎng)瓶中接種1.0×10⁶-2.0×10⁶個(gè)細(xì)胞，其中添加的培養(yǎng)基的體積為8-12mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)條件均為：37℃，5％CO₂，飽和濕度。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述貼壁培養(yǎng)8-15h后，吸去培養(yǎng)液以去掉未貼壁的細(xì)胞和細(xì)胞碎片，重新加入培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述繼續(xù)培養(yǎng)2-3天后，收集培養(yǎng)液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述過(guò)濾采用孔徑不小于20μm篩網(wǎng)進(jìn)行，優(yōu)選采用孔徑20-40μm篩網(wǎng)進(jìn)行；

進(jìn)一步地，得到的含有所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因子復(fù)合物的液體還包括分裝的步驟，然后進(jìn)行低溫保存。

9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法制得的含有臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因子復(fù)合物的液體在改善皮膚狀態(tài)中的應(yīng)用。

10.一種化妝品，其特征在于，含有權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備方法制得的含有臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因子復(fù)合物的液體；

進(jìn)一步地，所述化妝品包括乳液、面霜、眼霜。