[發明專利]檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436 insC位點突變的引物和方法

在審

• 申請號: 201811406618.2
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN109402234A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 牛林梅;吳鵬飛;王淑一
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC堿基突變的引物，其特征在于，包括擴增DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點的引物；采用Sanger測序技術，可用于快速檢測假性肥大型肌營養不良(Duchenne/Becker milscular dystrophy，DMD/BMD)患者體內DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點突變情況。利用本發明完成的檢測結果準確，對DMD/BMD的臨床鑒別診斷有重要的參考意義。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD6436 insC位點突變的引物，采用普通PCR結合Sanger測序技術，可用于快速檢測DMD/BMD患者體內DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436 insC位點的突變情況。

背景技術

假性肥大型肌營養不良(Duchenne/Becker milscular dystrophy，DMD/BMD)是常見的X-連鎖隱性遺傳性肌肉疾病，由DMD基因突變所致。DMD在活產男嬰中的發病率為1/3500，多于5歲前發病，病程進展快，12歲前失去獨立行走能力，20 歲左右死于心力衰竭或呼吸衰竭。BMD起病年齡較DMD晚，病程進展緩慢，一般于16歲后失去獨立行走能力。由于本病發病率與致殘率高，給患者家庭帶來沉重的精神和經濟負擔，目前臨床上尚無有效的治療方法，所以準確、快速的DMD 致病基因檢測，優質的遺傳咨詢及準確的產前診斷對防止患兒的出生顯得尤為重要。

肌萎縮蛋白基因(dystrophin gene，DMD)是人類最大的基因之一，位于 Xp21.2，長2.4Mb，約占人類基因組的0.1％，含79個外顯子，其mRNA序列長14Kb，編碼3685個氨基酸，組成抗肌萎縮蛋白(dystrophin)。DMD基因突變導致肌細胞內缺乏dystrophin蛋白，造成肌細胞膜不穩定，無法在收縮時保持完整，出現鈣內流，最終導致肌細胞壞死和功能缺失，肌肉組織纖維化，表現為假性肥大肌營養不良。Sanger測序法是基因檢測的主要手段之一，也是基因檢測的金標準。通過測序法對DMD基因突變進行檢測可發現DMD基因已知和未知的全部類型的異常，為DMD/BMD的診斷提供依據。本發明中發現DMDA827T、 DMD A5741T和DMD6436 insC三個位點的突變在中國人群中普遍存在。因此，臨床在利用DMD基因突變輔助診斷DMD/BMD時需格外謹慎，加以區別。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436 insC位點突變的引物，采用PCR技術，可用于快速檢測DMD/BMD患者體內 DMD A827T、DMD A5741T和DMD6436 insC位點的突變情況。所述檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436 insC位點突變情況的引物，其特征在于，包括：

擴增DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436 insC位點的引物，其堿基序列為：

DMD A827T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATGTTCTGTTTTCTACCATGTTG

DMD A827T-R：AACAGCTATGACCATGTCAATAACAAAGCAGAATCACAT

DMD A5741T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGCTTCCTATACATGGGTC

DMD A5741T-R：AACAGCTATGACCATGTTTACCAGAAAACACATCACA

DMD6436insC-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTGTATTTCTTTCTTTGCCAG

DMD6436insC-R：AACAGCTATGACCATGTTCTTTAATGTTAGTGCCTTTCA。