[發明專利]檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436 insC位點突變的引物和方法在審
| 申請號： | 201811406618.2 | 申請日： | 2018-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN109402234A | 公開（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發明（設計）人： | 牛林梅;吳鵬飛;王淑一 | 申請（專利權）人： | 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州千克知識產權代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 310030 浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 位點突變 肌營養不良 檢測結果 堿基突變 鑒別診斷 快速檢測 肥大型 檢測 可用 擴增 位點 體內 參考 | ||
1.檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點突變情況的引物，其特征在于，包括：
擴增DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點的引物，其堿基序列為：
DMD A827T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATGTTCTGTTTTCTACCATGTTG
DMD A827T-R：AACAGCTATGACCATGTCAATAACAAAGCAGAATCACAT
DMD A5741T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGCTTCCTATACATGGGTC
DMD A5741T-R：AACAGCTATGACCATGTTTACCAGAAAACACATCACA
DMD6436insC-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTGTATTTCTTTCTTTGCCAG
DMD6436insC-R：AACAGCTATGACCATGTTCTTTAATGTTAGTGCCTTTCA。
2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，還包括測序引物，其堿基序列為：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
3.如權利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列DMD A827T-F和DMD A827T-R是擴增DMD基因第827位堿基的引物；引物序列DMD A5741T-F和DMD A5741T-R是擴增DMD基因第5741位堿基的引物；引物序列DMD 6436insC-F和DMD 6436insC-R是擴增DMD基因第6436位堿基的引物。
4.檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點突變情況的方法，包括以下步驟：
(1)抽提外周血或肌肉組織中的基因組DNA；
(2)用PCR擴增步驟1中提取的DNA；
(3)對步驟2中的擴增產物進行測序；
(4)對測序結果進行判斷，確定DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點是否發生突變；
其中PCR擴增引物為：
DMD A827T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATGTTCTGTTTTCTACCATGTTG
DMD A827T-R：AACAGCTATGACCATGTCAATAACAAAGCAGAATCACAT
DMD A5741T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGCTTCCTATACATGGGTC
DMD A5741T-R：AACAGCTATGACCATGTTTACCAGAAAACACATCACA
DMD6436insC-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTGTATTTCTTTCTTTGCCAG
DMD6436insC-R：AACAGCTATGACCATGTTCTTTAATGTTAGTGCCTTTCA。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，測序引物堿基序列為：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
6.一種檢測DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：
(i)血液/組織DNA抽提試劑；
(ii)檢測體系PCR擴增反應液：包括擴增DMD A827T、DMD A5741T和DMD 6436insC位點的引物，其堿基序列為：
DMD A827T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATGTTCTGTTTTCTACCATGTTG
DMD A827T-R：AACAGCTATGACCATGTCAATAACAAAGCAGAATCACAT
DMD A5741T-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGCTTCCTATACATGGGTC
DMD A5741T-R：AACAGCTATGACCATGTTTACCAGAAAACACATCACA
DMD6436insC-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTGTATTTCTTTCTTTGCCAG
DMD6436insC-R：AACAGCTATGACCATGTTCTTTAATGTTAGTGCCTTTCA；
(iii)測序體系試劑：包括測序引物，其堿基序列為：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG；
(iv)陽性對照品和陰性對照品。
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