[發明專利]一種獲得腫瘤特異性T細胞受體的方法

在審

• 申請號: 201811404330.1
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN109485721A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 杜學明
• 申請（專利權）人: 杜學明
• 主分類號: C07K14/725
• 分類號: C07K14/725;C12N15/12;C12N5/0783;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種獲得腫瘤特異性T細胞受體的方法。本發明公開的獲得腫瘤T細胞受體的方法包括：首先，獲得抗原肽特異性T細胞中T細胞受體基因序列；然后，根據抗原肽特異性T細胞受體基因序列制備得到抗原肽特異性T細胞受體；抗原肽特異性T細胞，來自利用抗原肽治療后免疫反應陽性和/或腫瘤癥狀緩解的腫瘤患者。將抗原肽特異性T細胞受體基因導入T細胞并使抗原肽特異性T細胞受體基因得到表達，可得到特異性TCR?T細胞。本發明制備的特異性TCR?T細胞可以成功殺傷具有抗原肽相應的基因突變和HLA分型的腫瘤細胞，且具有很高的殺傷效率，具有很好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域中，一種獲得腫瘤特異性T細胞受體的方法。

背景技術

T細胞抗原受體(T cell receptor,TCR)是所有T細胞表面的特征性標志，具有識別與抗原呈遞細胞(APC)上的MHC分子相關的加工肽的復合物的能力。TCR是由α、β兩條肽鏈構成的異源二聚體，每條肽鏈分為可變區(V區)、恒定區(C區)、跨膜區和胞質區等幾部分；其胞質區很短，信號傳遞主要通過與其以非共價鍵結合的CD3分子進行。TCR分子屬于免疫球蛋白超家族，其抗原特異性存在于V區；V區又各有三個高變區CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3變異最大，直接決定了TCR的抗原結合特異性。在TCR識別MHC-抗原肽復合體時，CDR3直接與抗原肽相結合。

TCR在識別APC或者靶細胞上的MHC(人類主要組織相容性復合體)分子所提呈的抗原肽時，既要識別抗原肽，也要識別自身MHC分子的多態性部分，此現象即MHC限制性(MHCrestriction)。HLA(human lymphocyte antigen,人類淋巴細胞抗原)，受控于MHC的基因簇，是具有高度多態性的同種異體抗原，是目前所知人體最復雜的遺傳多態性系統，有幾十個基因座位，每個基因座位又有幾十個等位基因，且呈共顯性表達。HLA有A、B、C、DR和DQ等多個位點，分別稱為HLA-A，HLA-B，HLA-C，HLA-DR和HLA-DQ等。

T淋巴細胞通過特異性T淋巴細胞受體識別腫瘤細胞表面MHC-抗原肽復合物而被激活，活化后的T細胞可以直接溶解腫瘤細胞，或通過分泌細胞因子如干擾素、腫瘤壞死因子等抑制腫瘤生長。CD8+T細胞介導的特異性MHC-I類分子限制細胞免疫功能，在抗腫瘤免疫尤其重要。目前用于癌癥免疫療法的策略旨在為患者的T細胞配備腫瘤反應性TCR。通過轉導TCRα/β異二聚體構建TCR-T，使T細胞能夠重新高效的識別靶細胞。通過輸注能夠識別特異靶標的基因修飾T細胞，賦予免疫系統以新的非自然免疫活性。這種方法除了能像細胞毒性化療和靶向治療快速殺滅腫瘤外，還避免了疫苗和T細胞檢查點療法的延遲效應。TCR-T療法在一些臨床試驗中，已經證明了患者在減少甚至消除腫瘤負荷方面的巨大益處，尤其是在一些實體瘤上展現了令人振奮的療效。

腫瘤細胞會發生大量基因突變，有些突變會改變氨基酸編碼序列，導致腫瘤細胞表達正常細胞所沒有的異常蛋白。這些異常蛋白在細胞內(腫瘤細胞或抗原呈遞細胞)被蛋白酶酶解成肽段(抗原表位)，與MHC-I類或MHC-II類分子高親和力結合，并以復合物形式呈遞到細胞表面，與T細胞受體結合，T細胞被激活；激活后的T細胞擴增，浸潤腫瘤微環境，識別并殺傷腫瘤細胞。這種腫瘤細胞特異性的異常蛋白稱為新抗原(neoantigen)。

在各腫瘤中發現的突變的基礎上，分析基因突變的表達水平，以及抗原的HLA呈遞情況對潛在靶抗原進行篩選，患者特異性的新抗原可以通過計算進行預測。預測的抗原肽在GMP條件下生產，作為個體化腫瘤疫苗，可以用于腫瘤的免疫治療。

個體化疫苗在臨床上首先應用于晚期黑色素瘤病人中。其中一項臨床試驗，招募了6位患者。研究者為每位患者定制了13-20條新抗原的多肽疫苗。數據顯示，60％的多肽在患者體內引起了T細胞免疫反應。在這6位患者中，4位患者在接受疫苗兩年后沒有出現復發跡象。證明抗原肽可引起患者自體T細胞對腫瘤細胞的識別和殺傷，從而治療腫瘤。