[發(fā)明專利]一種血小板膜包裹載藥多孔納米顆粒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811397922.5
• 申請日: 2018-11-22
• 公開（公告）號: CN109432048B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱利民;王海軍;謝曉田
• 申請（專利權(quán)）人: 東華大學(xué)
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/34;A61K47/36;A61K47/46;A61K31/585;A61P35/00
• 代理公司: 上海泰能知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31233
• 代理人: 黃志達(dá);魏峯

1.一種血小板膜包裹載藥多孔納米顆粒，其特征在于，通過殼寡糖CS修飾PLGA后載蟾毒靈Bufalin，然后被血小板膜包裹得到。

2.一種血小板膜包裹載藥多孔納米顆粒的制備方法，包括：

(1)將PLGA加到含有EDC·HCl和NHS的溶液中活化，加入殼寡糖CS，氮氣氣氛下反應(yīng)，透析，冷凍干燥，得到殼寡糖修飾的PLGA，其中，PLGA、EDC·HCl和NHS的摩爾比為1:2-4:2-4，CS與PLGA的摩爾比為1:1-2:1；

(2)將步驟(1)中殼寡糖修飾的PLGA和蟾毒靈Bufalin以質(zhì)量比為5:1-15:1溶解于溶劑中，攪拌下加入到TPGS水溶液中，在空氣中攪拌反應(yīng)后，烘干溶劑，離心，用去離子水重懸，得到載有Bufalin的多孔納米顆粒CS-pPLGA/Bu NPs；其中殼寡糖修飾的PLGA與TPGS的質(zhì)量比為1:1-10:1，殼寡糖修飾的PLGA與溶劑的比例為1-15mg:0.8-3mL；

(3)通過大鼠心臟取血，獲得新鮮血液，通過梯度離心的方法提取血小板，提取的血小板經(jīng)過冷凍-融化循環(huán)得到中空的血小板，再經(jīng)超聲，得到血小板膜碎片；

(4)將步驟(2)中CS-pPLGA/Bu NPs與步驟(3)中血小板膜碎片混合，超聲、擠壓，得到血小板膜包裹載藥多孔納米顆粒PLTM-CS-pPLGA/Bu NPs，其中CS-pPLGA/Bu NPs與步驟(3)中血液的比例為3-5mg:4-6mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中含有EDC·HCl和NHS的溶液的溶劑為二甲基甲酰胺；活化溫度為-5-5℃，活化時間為0.3h-1h。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中加入水溶性殼寡糖CS是在升溫至室溫下進行的；反應(yīng)時間為45-50h。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中溶劑為丙酮；溶劑與TPGS水溶液的體積比為1:6-1:4；攪拌反應(yīng)溫度為室溫，攪拌反應(yīng)時間為2-4h。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中攪拌速度為600-1000rpm；離心速度為7000-9000rpm，離心重復(fù)3次。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中梯度離心的方法具體為：將抗凝血加到含有分離液的離心管中于250-300g下離心10-20min，吸取第一層血小板血漿加到另一個離心管中，加入PBS洗滌三次，得到血小板，其中抗凝血與分離液的體積比為1:2。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中血小板膜碎片于含有蛋白酶抑制劑的PBS緩沖液中保存，其中蛋白酶抑制劑的濃度為2mM。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)中超聲的工藝參數(shù)為：功率為80-120w，頻率為30-50KHz，時間為4-6min。

10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)中擠壓是用孔徑為200nm的濾膜。