[發(fā)明專(zhuān)利]一種非抗體依賴的蛋白質(zhì)甲基化修飾富集分析方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811397614.2
• 申請(qǐng)日: 2018-11-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111208244A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗華;孫明偉;梁振;單亦初;趙寶鋒;楊開(kāi)廣;張玉奎
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/08
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明涉及一種非抗體依賴的蛋白質(zhì)甲基化修飾富集分析新方法及應(yīng)用，包括Lys?C/Trypsin/Arg?C連續(xù)酶切、酶切肽段N段氨基的固定、甲基化修飾肽段的選擇性釋放及LC?MS/MS分析及數(shù)據(jù)解析甲基化修飾位點(diǎn)信息。首先對(duì)含有蛋白質(zhì)甲基化修飾的樣本進(jìn)行Lys?C/Trypsin/Arg?C多種酶切消化，然后將連續(xù)酶切得到的肽段與氨基反應(yīng)活性材料反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)肽段的固定，最后利用特異性酶對(duì)固定肽段中含有甲基化修飾的賴氨酸和精氨酸N端肽鍵特異性酶切。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)現(xiàn)了多種類(lèi)型低豐度蛋白質(zhì)甲基化修飾的同時(shí)富集，包括賴氨酸二甲基化修飾、賴氨酸三甲基化修飾、精氨酸單甲基化修飾以及精氨酸二甲基化修飾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種非抗體依賴的蛋白質(zhì)甲基化修飾富集分析新方法及應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了多種類(lèi)型蛋白質(zhì)甲基化修飾的同時(shí)分析。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)甲基化修飾是一種廣泛存在的且具有重要生物功能的翻譯后修飾之一，如組蛋白質(zhì)甲基化修飾參與基因的轉(zhuǎn)錄、DNA的損傷修復(fù)、信號(hào)傳導(dǎo)等多種生命活動(dòng)過(guò)程。蛋白質(zhì)甲基化修飾的調(diào)控異常與多種疾病存在著密切的聯(lián)系，如蛋白質(zhì)甲基化修飾調(diào)控異常與乳腺癌、肺癌、淋巴癌、艾滋病以及心血管疾病等密切相關(guān)。此外蛋白質(zhì)甲基化修的動(dòng)態(tài)變化對(duì)生命活動(dòng)具有重要的調(diào)節(jié)作用，如Jarid2蛋白質(zhì)116賴氨酸甲基化修飾(Kme)通過(guò)增強(qiáng)甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體PRC2的活性進(jìn)而調(diào)節(jié)組蛋白H3上27位賴氨酸三甲基化修飾(H2K27me3)的聚集，Jarid2的K116me和組蛋白H3K27me3之間的交互作用(cross-talk)對(duì)胚胎干細(xì)胞的分化具有重要的作用(Molecular Cell，2015，57(5)：769-783)；TP53蛋白質(zhì)370位發(fā)生二甲化修飾時(shí)，TP53則表現(xiàn)為激活狀態(tài)；在LSD1去甲基化酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)閱渭谆揎棔r(shí)，此時(shí)的TP53表現(xiàn)為失活狀態(tài),通過(guò)對(duì)TP53的甲基化狀態(tài)的調(diào)控，從而調(diào)節(jié)TP53的腫瘤抑制和轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用(Nature，2007，449(7158)：105-108)。因此對(duì)生物體內(nèi)蛋白質(zhì)甲基化修飾位點(diǎn)進(jìn)行深度覆蓋分析，對(duì)研究蛋白質(zhì)甲基化修飾以及cross-talk在疾病的發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控作用具有重要意義。