[發明專利]一種提高魚鱗明膠品性的方法

有效

• 申請號: 201811397441.4
• 申請日: 2018-11-22
• 公開（公告）號: CN109504665B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 陳雪嵐;涂宗財;李雙;黃明珠
• 申請（專利權）人: 江西師范大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12P21/00;C07K14/78
• 代理公司: 南昌華成聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 36126
• 代理人: 張建新

1.一種提高魚鱗明膠品性的方法，包括以下步驟：

（1）將含有P4H編碼基因的微生物的DNA序列除去終止密碼子；

（2）在除去了終止密碼子的P4H編碼基因的兩端分別加上限制性酶切位點；

（3）以表達質粒作為載體，采用限制性內切酶將P4H的編碼基因及載體進行消化產生互補的粘性末端，再在連接酶的作用下連接起來構建重組質粒；

（4）將重組質粒轉入感受態宿主中，篩選陽性克隆子，進行誘導表達P4H；

（5）分離純化P4H；

（6）將魚鱗明膠溶解于緩沖液中，加入純化的P4H，并加入所需的其他物質，混勻并在一定溫度下反應一段時間，然后滅活，得到改性的魚鱗明膠；

其中，在步驟（1）中，含有P4H編碼基因的微生物是熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）；

在步驟（6）中，將魚鱗明膠加入至pH 5.5的0.02mol/L Tris/HCl 緩沖液中，于55℃水浴鍋中溶解制備成質量體積比為10%的母液，恒溫100rpm攪拌1h；向母液中加入純化的質量體積比為15%、20%、25%或30%的P4H酶，加入α-酮戊二酸、L-抗壞血酸和FeSO₄·7H₂0至其終濃度分別為40mmol/L、8mmol/L和4mmol/L，使魚鱗明膠的終濃度質量體積比為6.67%，混勻后于26°C充分反應30min，最后于100°C滅活5min。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在步驟（2）中，限制性酶切位點是XhoI和EcoRI。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在步驟（3）中，選擇pET-28a質粒作為表達載體。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在步驟（4）中，通過熱激方法將重組質粒轉入感受態宿主大腸桿菌（Escherichia coli）或E. coli –Roestta中，采用抗性、菌落PCR篩選陽性克隆子。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在步驟（5）中，采用Ni柱進行親和層析純化或分離純化包涵體。

6.一種改性的魚鱗明膠，其特征在于：由權利要求1~5任一所述的方法得到。