[發(fā)明專利]人工合成的內(nèi)含子、哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞、表達(dá)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811394239.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-21
• 公開（公告）號(hào): CN109468323B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王小引;王天云;徐丹華;牛敬媛;王芳;倪天軍;郭瀟;秦川;楊獻(xiàn)軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;河南普諾易生物制品研究院有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/85;C12N15/67;C12N5/10
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體，其特征在于：所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體含有目的基因和如SEQ ID NO.1所示人工合成的內(nèi)含子的核苷酸序列；所述內(nèi)含子插入到目的基因的下游；所述目的基因表達(dá)EGFP或阿達(dá)木抗體；所述重組表達(dá)載體的出發(fā)載體為pIRES-Neo，將pIRES-Neo載體的內(nèi)含子核苷酸序列替換為序列如SEQ ID NO.1所示的人工合成的內(nèi)含子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體，其特征在于：所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體啟動(dòng)子為CMV、SV40、EF-1α、CAG中的任意一種。

3.一種哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，其特征在于：所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞由權(quán)利要求1或2所述的哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染得到。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，其特征在于：所述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞為CHO、HEK293、BHK或SP2/O。

5.一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)外源蛋白的表達(dá)方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）構(gòu)建包含哺乳動(dòng)物來源蛋白質(zhì)序列以及如SEQ ID NO.1所示的人工合成的內(nèi)含子的核苷酸序列的重組表達(dá)載體；所述內(nèi)含子插入到哺乳動(dòng)物來源蛋白質(zhì)序列的下游；所述哺乳動(dòng)物來源蛋白質(zhì)序列表達(dá)EGFP或阿達(dá)木抗體；所述重組表達(dá)載體的出發(fā)載體為pIRES-Neo；將pIRES-Neo載體的內(nèi)含子核苷酸序列替換為序列如SEQ ID NO.1所示的人工合成的內(nèi)含子；

（2）將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中；

（3）培養(yǎng)步驟（2）中的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，表達(dá)目的蛋白。

6.如權(quán)利要求1所述的哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組表達(dá)載體、或者如權(quán)利要求3所述的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞在提高哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組蛋白表達(dá)水平中的應(yīng)用。