[發(fā)明專利]一種新型賴氨酸特異性內(nèi)切酶及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811394022.5 | 申請日： | 2018-11-21 |
| 公開（公告）號： | CN109439643B | 公開（公告）日： | 2020-12-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 賴紅星;馬文柱;夏玉平;姚元鋒;雷春紅;肖擁軍;羅湘冀 | 申請（專利權(quán)）人： | 珠海冀百康生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/64 | 分類號： | C12N9/64;C12N15/57;C12N15/70 |
| 代理公司： | 廣州嘉權(quán)專利商標事務(wù)所有限公司 44205 | 代理人： | 陳慧華 |
| 地址： | 519000 廣東省珠海市金灣區(qū)*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 新型 賴氨酸 特異性 內(nèi)切酶 及其 制備 方法 | ||
1.一種賴氨酸特異性內(nèi)切酶，其特征在于，該酶的結(jié)構(gòu)為：賴氨酸特異性內(nèi)切酶核心-連接肽-組氨酸標簽；
所述連接肽為GGGGSGGGGSGGGGS；
所述組氨酸標簽為5個連續(xù)的組氨酸；
該酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.一種如權(quán)利要求1所述的賴氨酸特異性內(nèi)切酶的制備方法，其特征在于，其步驟如下：
1)構(gòu)建含有該賴氨酸特異性內(nèi)切酶編碼基因的重組載體；
2)將重組載體導(dǎo)入大腸桿菌宿主細胞，得到重組大腸桿菌細胞；
3)對重組大腸桿菌細胞進行發(fā)酵培養(yǎng)，加入誘導(dǎo)劑，收集經(jīng)表達后的重組大腸桿菌細胞；
4)高壓均質(zhì)破碎步驟3)得到的重組大腸桿菌細胞，得到含有新型賴氨酸特異性內(nèi)切酶的細胞懸液；
5)對含有新型賴氨酸特異性內(nèi)切酶的細胞懸液進行純化、冷凍干燥，得到賴氨酸特異性內(nèi)切酶粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述重組載體包含T7啟動子或T7lac啟動子、編碼權(quán)利要求1所述的賴氨酸特異性內(nèi)切酶的多核苷酸分子以及位于所述多核苷酸分子下游的T7終止子，其中所述多核苷酸分子位于所述啟動子的下游。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述誘導(dǎo)劑為0.3mM的IPTG。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟5)中所述純化方法為高壓均質(zhì)、鎳柱親和層析。
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