[發明專利]一種用于檢測慢病毒RCL的引物、探針及檢測方法

在審

• 申請號: 201811392904.8
• 申請日: 2018-11-21
• 公開（公告）號: CN109295261A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 陳必成;凌發忠
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京康思博達知識產權代理事務所(普通合伙) 11426
• 代理人: 范國鋒;路永斌

1.一種用于檢測慢病毒RCL的引物對，其特征在于，所述引物對包括正向引物和反向引物，其中，所述正向引物的序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述反向引物的序列包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

2.一種用于檢測慢病毒RCL的探針，其特征在于，所述探針序列為如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

3.一種用于檢測慢病毒RCL的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物對和權利要求2所述的探針。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性質粒、PCR反應體系和酶體系。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述標準陽性質粒的制備方法包括以下步驟：

步驟i，獲取慢病毒RCL的靶序列片段；

步驟ii，構建包含上述靶序列片段的重組質粒；

步驟iii，測定重組質粒的濃度，并計算相應拷貝數，得到標準陽性質粒。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應體系包括緩沖液(Buffer)、MgCl2、dNTPs；所述酶體系包括反轉錄酶和熱啟動DNA聚合酶。

7.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，步驟i包括以下子步驟：

步驟i-a，獲取慢病毒RCL的cDNA；

步驟i-b，以上述獲取的cDNA為模板，擴增得到慢病毒RCL的靶序列片段。

8.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，步驟ii包括以下子步驟：

步驟ii-a，將得到的靶序列片段與載體進行連接；

步驟ii-b，將連接好的載體轉化至感受態細胞中進行表達，然后加入液體培養基進行培養，得到菌液；

步驟ii-c，將上述菌液涂布至平板培養基上培養，待形成單菌落后，挑選單菌落進行檢測；

步驟ii-d，根據檢測結果，選取菌落進行擴大培養，然后抽提質粒。

9.一種檢測慢病毒RCL的方法，優選采用權利要求3至8之一所述的試劑盒進行，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟1，對待測樣本進行處理；

步驟2，對處理后的待測樣本進行檢測。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述檢測優選采用熒光定量PCR方法進行，所述反應程序為：95℃下預變性30s；然后95℃變性5s，60℃退火和延伸共30s，進行40個循環，4℃保存。