[發明專利]用于檢測熱休克蛋白70(HSP70)的磁微粒分離化學發光免疫測定法

在審

• 申請號: 201811392775.2
• 申請日: 2018-11-21
• 公開（公告）號: CN109613255A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 郭健夫;桂穎;王義君
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/58;G01N21/76
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

本發明公開了一種人體熱休克蛋白70(HSP70)磁微粒分離化學發光免疫檢測方法，試劑盒組成包括：校準品、質控品試劑A、試劑B、清洗液濃縮液、發光底物液，其中，校準品為含一系列濃度的熱休克蛋白70(HSP70)抗原，用于建立標準曲線；質控品為含一定濃度熱休克蛋白70(HSP70)抗原的緩沖液配制而成；試劑A為含一定濃度磁微粒標記的熱休克蛋白70(HSP70)抗體溶液；試劑B為含一定濃度堿性磷酸酶標記的熱休克蛋白70(HSP70)抗體溶液；清洗液濃縮液用于配制清洗液；發光底物液為堿性磷酸酶(ALP)催化的發光底物溶液。本發明極大地提高了免疫反應的信號強度和靈敏度，使低含量物質在進行免疫結合時也能產生很強的化學發光信號，為人體熱休克蛋白70(HSP70)的檢測提供了一種更準確、精確、方便、快捷和簡單的方法。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，提供了用于檢測熱休克蛋白70(HSP70)的磁分離化學發光免疫測定法，適用于人血清熱休克蛋白70(HSP70)定量檢測。

背景技術

各種生物有機體受到外界不利或有害因素刺激時，會發生一種生理性的快速、短暫細胞代謝調節，此期間細胞內一些正常基因的表達受到抑制，而一組特殊基因則被激活并表達增強，這一現象被稱為熱休克反應(heatshockresponse，HSR)，這組特殊基因就是熱休克基因，所產生的蛋白質稱為熱休克蛋白(heatshockproteinHSP)。這類具有重要生理功能且具有高度保守性，普遍存在于整個生物界，在應激狀態下可被導表達。1.Hsp70的概況

1962年，Ritossa在果蠅的研究中首次發現，短暫的熱休克可以誘導唾液腺染色體出現3個膨突，提示這一區帶轉錄加強，他將這一現象稱為“熱休克反應(HSR)”。1974年，Tissi6res等采用SDS-PAGE及放射性自顯影技術，從熱休克果蠅唾液腺細胞中分離出一組特殊蛋白質，并確定這種蛋白質的合成與染色體“膨松”有關，證實高溫引起果蠅幼蟲染色體蓬松是由于熱休克激發基因轉錄以合成的特異蛋白引起。由于這種蛋白質是在熱刺激下所產生，故稱其為熱休克蛋I～(HSP)。后來人們發現除高溫外的其他刺激如缺血、缺氧、重金屬、病毒感染、組織損傷等均可誘導HSP的合成，并關閉正常蛋白質的合成，故也有人稱其為應激蛋白(stressprotein，SP)或熱應激蛋白(heatstressprotein，HSP)。10年后，Nover與Soger等先后闡明了編碼HSP的序列、基因結構及其位點，并確定是由于高熱影響到該基因中保守的上游調節序列即熱休克元件(heatshockelement，HSE)，由此引起熱休克應答，轉錄合成HSP。

2.Hsp70的分類

根據其分子量及等電點不同將HSPs分成五大類(或家族)，分別為：低分子量HSPs家族、中等分子量HSPs家族、Hsp70家族、Hsp90家族和Hspl10家族。其中Hsp70是HSP家族中最保守、最主要、含量最豐富的一種，具有多種功能，是一種非特異性細胞保護蛋白，也是近年來的研究備受關注的一類。人體細胞含有多個Hsp70家族成員，包括應激誘導的Hsp70(又稱為Hsp72或Hsp70I)、結構型熱休克蛋白Hsc70(Hsp73)、線粒體Hsp75(mtHsp75)和位于內質網的Grp78(BiP)。

Hsp70家族成員結構上的共性賦予其一些共同的生物學特性：(1)所有的Hsp70都具有較高的ATP親和性及氨基端具有弱的ATPase活性，與肌肉的肌動蛋白結構很相似；(2)當ATPase被激活時，可與伸展的多態結合；(3)保護各種酶免受熱損傷，使聚合的蛋白質解聚；(4)可與各種未折疊或新合成的多肽鏈結合，幫助其正確折疊，協助它們的跨膜轉運；(5)發揮作用要靠其他HSP或細胞因子的輔助；(6)具有高度保守鈣調素結合結構域。

3.Hsp70基因與蛋白質結構特點