[發(fā)明專利]一種測定人體甘膽酸含量的磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811392077.2
• 申請日: 2018-11-21
• 公開（公告）號(hào): CN109521005A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王國武;李冉
• 申請（專利權(quán)）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76
• 代理公司: 北京思元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

本發(fā)明公開了一種測定人體甘膽酸含量的磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，試劑盒包括：甘膽酸R1試劑、R2試劑、磁分離試劑、校準(zhǔn)品液系列和化學(xué)發(fā)光底物液；甘膽酸R1試劑是異硫氰酸熒光素標(biāo)記的抗甘膽酸?BSA鼠單克隆抗體稀釋液，甘膽酸R2試劑是堿性磷酸酶標(biāo)記的甘膽酸抗原稀釋液，磁分離試劑為抗異硫氰酸熒光素鼠單克隆抗體包被的磁微粒稀釋液，甘膽酸校準(zhǔn)品液是由合成的甘膽酸和緩沖液組成，發(fā)光底物液是堿性磷酸酶催化的含二氧雜環(huán)乙烷的Tris?HCl緩沖液。本發(fā)明極大地提高了免疫反應(yīng)的信號(hào)強(qiáng)度和靈敏度，使低含量物質(zhì)在進(jìn)行免疫結(jié)合時(shí)也能產(chǎn)生很強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，為甘膽酸的檢測提供了一種更準(zhǔn)確、精確、方便、快捷和簡單的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)用診斷試劑領(lǐng)域，特別是涉及一種采用磁微粒化學(xué)發(fā)光技術(shù)和抗原-抗體結(jié)合技術(shù)檢測人體甘膽酸含量的磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒。

背景技術(shù)

甘膽酸的分子量為466.3，是膽汁酸的主要成分之一，甘氨酸的羧基與膽酸側(cè)鏈末端的羥基通過肽鍵結(jié)合后即可形成甘膽酸。甘膽酸是一種初級(jí)膽汁酸，它是膽固醇在肝細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過復(fù)雜的酶促反應(yīng)后轉(zhuǎn)變而成的。

甘膽酸主要由肝細(xì)胞合成，經(jīng)毛細(xì)膽管、膽管排入膽囊，然后隨同膽汁進(jìn)入十二指腸，促進(jìn)脂肪的消化與吸收。大部分甘膽酸在回腸和結(jié)腸末端被重吸收，經(jīng)門靜脈再回肝臟，由肝細(xì)胞攝取再利用。重吸收的甘膽酸又進(jìn)入肝-腸循環(huán)，機(jī)體即是通過這種循環(huán)機(jī)制充分地利用甘膽酸。甘膽酸在血清中主要以結(jié)合蛋白的形式存在，外周血中膽酸在正常情況下含量甚微。正常成人無論空腹或餐后,其血清中的甘膽酸都穩(wěn)定在一個(gè)較低的水平。

當(dāng)肝細(xì)胞受損或膽汁郁滯時(shí)，肝臟對甘膽酸的攝取和排泄會(huì)發(fā)生異常，從而引發(fā)甘膽酸代謝和循環(huán)紊亂，導(dǎo)致血液中的甘膽酸含量升高。此外，甘膽酸濃度的高低與肝細(xì)胞損害程度即膽汁酸代謝障礙程度直接相關(guān)。

近年來有大量的研究報(bào)道表明，甘膽酸在肝膽疾病診斷中具有非常重要的臨床意義。肝細(xì)胞一旦病變即可引起血液中甘膽酸濃度升高。甘膽酸在患有肝膽疾病的患者中陽性率頗高，例如在：急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌、膽石癥，黃疸，膽管、膽囊排泄功能障礙，梗阻性肝病，腸-肝循環(huán)障礙等疾病患者體內(nèi)的水平均會(huì)顯著升高，并且通常具有出現(xiàn)早、恢復(fù)慢的特點(diǎn)。甘膽酸是妊娠晚期血清中最主要的膽汁酸組分。正常妊娠時(shí)孕婦血清CG水平隨孕周逐步增高，至足月妊娠CG值較非孕時(shí)增加30％-60％。隨著妊娠月份的增加，由于血中孕酮水平的增高，降低了平滑肌的張力，導(dǎo)致妊娠期間膽囊張力降低和排空抑制，使肝臟對膽汁的攝取及排泄發(fā)生障礙，引起膽汁不同程度的淤積。因此，部分妊娠婦女血清CG值可出現(xiàn)生理性增高，但臨床上并沒有明顯的ICP癥狀。隨著CG值的升高程度不同，對母嬰有著不同程度的損傷，且CG值越高危害越大。大量研究顯示，孕婦血清CG水平由于妊娠期胎盤合成和分泌大量雌激素和孕激素以及代謝負(fù)荷增大，可能誘發(fā)肝膽系統(tǒng)的變化，使孕婦易患妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)。ICP患者血清CG水平較正常孕婦顯著增高，甚至可達(dá)10-100倍，隨ICP患者血清CG增高使羊水污染率、早產(chǎn)率、胎兒宮內(nèi)窘迫率及剖宮產(chǎn)率增高，甘膽酸增高10倍以上，這些危險(xiǎn)進(jìn)一步增加。當(dāng)孕婦有ICP時(shí)，肝小葉中央?yún)^(qū)和毛細(xì)血管內(nèi)有膽汁淤積及膽栓存在、膽汁排泄障礙導(dǎo)致膽酸在外周循環(huán)中的堆積，致使血中CG含量增高，并產(chǎn)生皮膚瘙癢等癥狀。由于孕婦血液及羊水中膽汁酸均升高，使胎盤絨毛靜脈腔內(nèi)外均處于高濃度膽汁酸刺激之中，引起血管收縮，胎盤絨毛表面血管痙攣，氧合血流量減少，導(dǎo)致胎兒缺氧，可出現(xiàn)各種并發(fā)癥，如胎兒宮內(nèi)窘迫、早產(chǎn)等。國內(nèi)報(bào)道，早產(chǎn)率為13％-42.4％，胎兒宮內(nèi)窘迫發(fā)生率為44％-60.6％。因此，甘膽酸可作為肝膽疾病診斷的良好指標(biāo)。

目前已知的甘膽酸檢測方法主要有RIA(radioimmunoassay放射免疫測定法)法、均相酶免疫檢測法、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、高效液相色譜法、氣相色譜法和氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)。但是，這些方法都存在一定的缺陷，RIA法污染大、ELISA法自動(dòng)化程度低且操作復(fù)雜繁瑣，高效液相色譜法、氣相色譜法和氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法不適合廣泛用于臨床檢測。