[發(fā)明專利]一種鐵皮石斛葡甘聚糖

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811388543.X
• 申請日: 2018-11-21
• 公開（公告）號: CN109651532B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉京晶;斯金平;吳世華;梁君玲;俞巧仙;史小娟
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江農(nóng)林大學(xué);浙江森宇有限公司
• 主分類號: C08B37/14
• 分類號: C08B37/14;A61K31/736;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

1.一種鐵皮石斛葡甘聚糖，其特征在于，所述鐵皮石斛葡甘聚糖的重均相對平均分子量為398.4kDa；所述鐵皮石斛葡甘聚糖中甘露糖與葡萄糖的摩爾比為5.32：1，糖鏈連接方式為1,4-Man(p)：1,4-Glc(p)：t-Man(p)：t-Glc(p)摩爾比為3.77：1.00：0.08：0.03。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述鐵皮石斛葡甘聚糖，其特征在于，由如下方法制備得到：

S1.提取鐵皮石斛粗多糖：

S11.取鐵皮石斛莖段，加入溫水進行攪碎榨汁，控制溫度在50～70℃，料液比為1:3～1:5；

S12.將S11得到的溶液離心，上清液濃縮后加入無水乙醇，4℃放置過夜；

S13.將S12得到的溶液離心，沉淀依次用80％乙醇、丙酮、無水乙醚洗滌，烘干，得鐵皮石斛粗多糖(CPS)；

S2.分離鐵皮石斛精多糖：

S21.鐵皮石斛粗多糖經(jīng)α-淀粉酶酶解后，加入無水乙醇4℃過夜，取沉淀；

S22.將S21得到的沉淀溶解，透析，濃縮，干燥，得到鐵皮石斛精多糖；

S3.純化鐵皮石斛純多糖：

S31.將鐵皮石斛精多糖通過DEAE-纖維素柱色譜，水洗、濃縮、干燥，檢測收集多糖流份；

S32.將S31收集的多糖流份經(jīng)葡聚糖凝膠G-200柱色譜純化，檢測收集純多糖流份；

S33.將S33收集的純多糖流份濃縮、干燥，得鐵皮石斛純多糖，即權(quán)利要求1所述鐵皮石斛葡甘聚糖(POW)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述鐵皮石斛葡甘聚糖，其特征在于，步驟S11所述鐵皮石斛的材料為2年生新鮮莖段；

步驟S12所述離心為1500～3000rpm離心20～40min，所述無水乙醇的用量為濃縮后上清液體積的4倍；

步驟S13所述離心為1500～3000rpm離心20～40min；烘干溫度為50℃，烘干至無乙醚味。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述鐵皮石斛葡甘聚糖，其特征在于，步驟S21所述酶解是在pH6.8～7.0條件下，使用終濃度為5U/mL的α-淀粉酶，38～40℃酶解反應(yīng)30～45min，再升溫至90～100℃后終止反應(yīng)；

步驟S21所述無水乙醇的用量為酶解后溶液體積的4倍；

步驟S22所述透析的截留分子量為14kDa；濃縮為60～70℃濃縮至原液體積的1/12～1/15。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述鐵皮石斛葡甘聚糖，其特征在于，步驟S2的具體操作為：按鐵皮石斛粗多糖溶解于蒸餾水中，配成10～15mg/mL溶液；將α-淀粉酶溶解于10mM Tris-馬來酸鹽緩沖液中，配成終濃度為5U/mL，按鐵皮石斛粗多糖與α-淀粉酶溶液100:1的比例，控制酶解溫度為38～40℃，溶液的pH為6.8～7.0，酶解30～45min后，再升溫至90～100℃后終止反應(yīng)；按照1:4的體積比，在上述反應(yīng)后的溶液中加入無水乙醇，攪拌均勻，4℃過夜，取沉淀；將沉淀復(fù)溶于蒸餾水中，配成10mg/mL溶液；用截留分子量為14kDa的透析袋透析72h，收集透析液于60～70℃濃縮至原液體積的1/12～1/15，冷凍干燥，得到鐵皮石斛精多糖；

步驟S3的具體操作為：取20～25mg/mL的鐵皮石斛精多糖溶液20mL，上DEAE-纖維素柱色譜，用蒸餾水以2mL/min流速進行洗脫，每5mL收集一份，采用苯酚硫酸法測定各流份中多糖類成分的OD值，合并第23～89流份，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60～70℃濃縮、冷凍干燥得多糖；所得多糖溶于蒸餾水中繼續(xù)經(jīng)葡聚糖凝膠G-200柱色譜，用蒸餾水以1mL/min流速進行洗脫純化，檢測收集純多糖流份進行合并，濃縮、冷凍干燥，得鐵皮石斛純多糖，即葡甘聚糖POW。

6.權(quán)利要求1所述鐵皮石斛葡甘聚糖在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤為黑色素瘤細胞株B16。