[發(fā)明專利]一種從海洋微藻中提取多不飽和脂肪酸的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811388031.3
• 申請(qǐng)日: 2018-11-21
• 公開（公告）號(hào): CN109468168A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鐸;李珊;李克磊;郭曉飛;趙峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)
• 主分類號(hào): C11B1/10
• 分類號(hào): C11B1/10;C11C1/02
• 代理公司: 青島高曉專利事務(wù)所(普通合伙) 37104
• 代理人: 黃曉敏

1.一種從海洋微藻中提取多不飽和脂肪酸的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)取海洋微藻粉50g，加入1100mL氯仿:甲醇＝1.2:1溶液；

(2)25℃，超聲波浸提7.5h得到海洋微藻粉中的脂類物質(zhì)，其中超聲波工作頻率40kHz,超聲功率100W；

(3)將超聲浸提后的液體過濾后轉(zhuǎn)移至分液漏斗，劇烈震蕩分液漏斗3min后，靜置過夜；

(4)當(dāng)上下分離液面出現(xiàn)明顯且上層澄清后，收集下層有機(jī)溶液于圓底燒瓶中，并于38.5℃下真空旋轉(zhuǎn)水浴蒸發(fā)，蒸干后用氯仿洗滌2-3次，再將圓底燒瓶轉(zhuǎn)移至一個(gè)特氟龍墊的螺蓋玻璃管中，用氮?dú)獯蹈陕确拢徊⒋蹈珊蟮玫降闹|(zhì)于-40℃下保存；

(5)將步驟(4)中得到的脂質(zhì)按照每克加入6mL甲醇溶劑、1.2g尿素的比例進(jìn)行富集，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)并在60℃下水浴10min后冷卻至-10℃進(jìn)行24h包合反應(yīng)；包合結(jié)束后迅速過濾取濾液，旋蒸除去甲醇，加入2mL 1.2mol/L的鹽酸維持酸性環(huán)境，再加入4mL正己烷萃取上層，然后用2mL 5％氯化鈉溶液除雜取上層直至呈中性；最后加入無水氯化鈉干燥，得到高純度的多不飽和脂肪酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從海洋微藻中提取多不飽和脂肪酸的方法，其特征在于將提取好的多不飽和脂肪酸樣品通過氣象色譜檢測(cè)純度，具體過程如下：

(1)將提取的樣品用氯仿定容至50mL后，取5mL于帶旋蓋的試管中用氮?dú)獯蹈桑偃?mLKOH甲醇溶液加入樣品，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，60℃下反應(yīng)2.5h；反應(yīng)完成后，氮吹儀吹去大部分溶劑，加入5mol/L鹽酸2.5mL，使整個(gè)體系呈酸性；加入5mL石油醚萃取，靜置約10min，取上層有機(jī)相用5％氯化鈉洗滌充分，洗滌充分后水相經(jīng)pH試紙檢測(cè)呈中性；取有機(jī)相用無水硫酸鈉除水后蒸干，即得到脂肪酸甲酯；

(2)將得到的脂肪酸甲酯進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)分析，具體條件為：氮?dú)鈮?0kPa，氫氣壓75kPa，毛細(xì)血管柱，使用FID檢測(cè)器；初溫140℃保持2min，以20℃/min升溫至200℃且每升溫1min后保持10min，再在1min內(nèi)升溫至220℃后保持7min，數(shù)據(jù)通過色譜工作站采集。