[發明專利]貓血清淀粉樣蛋白A及其單克隆抗體的制備方法和應用在審
| 申請號: | 201811384920.2 | 申請日: | 2018-11-20 |
| 公開(公告)號: | CN109517050A | 公開(公告)日: | 2019-03-26 |
| 發明(設計)人: | 劉清泉;胡祥葉;朱偉;項美華;武戌青;王立童;吳瓊杉;余銘恩 | 申請(專利權)人: | 杭州賢至生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C07K14/47 | 分類號: | C07K14/47;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/18;C12R1/19 |
| 代理公司: | 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340 | 代理人: | 朱海江 |
| 地址: | 311100 浙江省杭州市余杭*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 重組蛋白 血清淀粉樣蛋白A 單克隆抗體 核苷酸序列 大腸桿菌偏愛密碼子 生物工程技術領域 純化單克隆抗體 制備方法和應用 優勢抗原表位 原核表達系統 雜交瘤細胞株 重組表達載體 氨基酸序列 感染性炎癥 化學合成 細胞融合 早期診斷 銪離子 單抗 多輪 構建 可用 正交 配對 制備 篩選 轉換 | ||
1.一種重組蛋白,其特征在于該重組蛋白具有如序列表SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。
2.一種重組蛋白,其特征在于該重組蛋白包含如序列表SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示的氨基酸序列。
3.一種核苷酸序列,其特征在于該核苷酸序列如序列表SEQ ID No:4所示,可編碼權利要求1-2所述的重組蛋白。
4.一種質粒載體,其特征在于該質粒載體含有權利要求3所述的核苷酸序列。
5.一種采用權利要求4所述質粒載體轉化的菌株。
6.根據權利要求1-2所述的重組蛋白,其特征在于可用于貓血清淀粉樣蛋白A單克隆抗體的制備,包括:
(a)合成權利要求3所述的核苷酸序列,并連接質粒載體,構建重組貓血清淀粉樣蛋白A表達載體;
(b)將步驟(a)中的重組貓血清淀粉樣蛋白A表達載體轉化大腸桿菌,篩選得到重組貓血清淀粉樣蛋白A表達菌株;
(c)大規模培養重組貓血清淀粉樣蛋白A表達菌株后,經純化獲取重組貓血清淀粉樣蛋白A;
(d)重組貓血清淀粉樣蛋白A多次免疫Balb/c小鼠后,取其脾臟細胞與sp2/0骨髓瘤細胞融合,經過多輪篩選得到雜交瘤細胞株;
(e)純化單抗并分別標記銪離子(Eu3+),通過正交實驗確定最佳單抗配對組合。
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