[發明專利]一種檢測大田軟海綿酸的熒光淬滅試紙及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201811383809.1
• 申請日: 2018-11-20
• 公開（公告）號: CN109655435B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 江天久;陳效;陳雨;劉威;劉建軍;黃新鳳
• 申請（專利權）人: 深圳市疾病預防控制中心（深圳市衛生檢驗中心;深圳市預防醫學研究所）;暨南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明屬于免疫測定技術方法領域，具體涉及一種檢測大田軟海綿酸的熒光淬滅試紙及其制備方法與應用。該熒光淬滅試紙包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC底板，其結合墊上噴涂有膠體金顆粒標記的OA單抗，硝酸纖維素膜上的檢測線為熒光微球與OA?BSA的混合液，質控線為熒光微球。該熒光淬滅試紙特異性強，沒有交叉反應，其靈敏度為1.56ppb，與同參數膠體金試紙相比提高9.6倍，其檢測限為3.12～50ppb，檢測時間短至9min。所得熒光淬滅試紙對貝肉組織的干擾具有很高的穩定性，通過配合簡易的熒光免疫層析照相儀及數據分析軟件就能夠達到對OA毒素的定量，其結果判斷直觀，不容易導致非專業人員的誤判，具有巨大的發展和應用前景。

技術領域

本發明屬于免疫測定技術方法領域，具體涉及一種檢測大田軟海綿酸的熒光淬滅試紙及其制備方法與應用。

背景技術

藻類生物毒素是繼細菌、寄生蟲、病毒和化學污染物之后另一個威脅海產品食用安全的重要因素，其中，腹瀉性貝類毒素(DSP)是一類大環內酯類或聚醚類化合物，在全球海域中均有分布。誤食了被DSP污染的貝類會引起胃腸紊亂，出現惡心、腹痛、腹瀉、嘔吐等癥狀。大田軟海綿酸(OA)是DSP的主要成分，我國2001年規定，水產品中OA安全標準為20μg/100g可食組織，2006年規定無公害水產品OA不得檢出。

目前，赤潮毒素的檢測方法主要有生物、化學和免疫分析法等。生物分析法應用廣泛和操作簡單，但測量結果重復性差、靈敏度低。化學分析法如高效液相色譜法，其靈敏度高、檢出限低，能實現毒素定性和定量分析，但是該法的樣品前處理復雜，如毒素DSP必須經衍生才能檢測，衍生后的產物不穩定，容易造成檢測結果誤差。為克服這一缺陷，色譜-質譜聯用技術逐漸成為檢測海洋毒素的潮流，但該分析法需要的儀器昂貴，只能在實驗室檢測，這些因素限制了該方法的廣泛應用。基于抗原-抗體反應檢測的酶聯免疫分析法具有高特異性和高靈敏度的特點，分析過程中無需樣品前處理，但檢測過程需要進行酶反應的比色檢測，檢測過程長達數小時且檢測過程仍需要實驗室環境，無法滿足現場快速分析檢測的要求。膠體金免疫側向層析技術具有快速、方便，能夠達到現場分析的要求，但膠體金免疫側向層析法仍存在一些不足。首先，該法的檢測結果是非直觀的，即T線出現信號表示結果為陰性，反之為陽性，這樣很容易導致非專業人員的誤判且不能定量，其次，膠體金免疫側向層析試紙條判斷結果為陽性的標準是T線不能觀察到信號，即需要較大量的待測物濃度才能使T線完全沒有信號出現，這較大程度的影響了試紙條的靈敏度。

發明內容

為克服現有技術的缺點和不足，本發明的首要目的在于提供一種直觀高靈敏度的檢測大田軟海綿酸(OA)的熒光淬滅試紙。

本發明的另一目的在于提供上述檢測大田軟海綿酸的熒光淬滅試紙的制備方法。

本發明的再一目的在于提供上述熒光淬滅試紙的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種檢測大田軟海綿酸的熒光淬滅試紙，以PVC為底板，其上依次連接樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，各部分在相鄰處重疊，結合墊上噴涂有膠體金顆粒標記的OA單抗，硝酸纖維素膜的平面中設置有檢測線和質控線，檢測線為熒光微球與OA-BSA的混合液，質控線為熒光微球；

其中，OA-BSA為OA與牛血清白蛋白(BSA)偶聯得到的檢測完全抗原。

上述檢測大田軟海綿酸的熒光淬滅試紙的制備方法，包括以下步驟：

(1)OA人工抗原的制備

用將OA與牛血清白蛋白(BSA)進行偶聯，將產物用PBS(磷酸鹽緩沖液)稀釋，得到檢測完全抗原OA-BSA；

(2)樣品墊的處理

將BSA、PEG4000、PVP40000和Tween-20加至PBS中，得到樣品墊處理液，將樣品墊浸泡于樣品墊處理液中，干燥；