[發明專利]一種空柄小牛肝菌菌絲的分離純化方法

在審

• 申請號: 201811378807.3
• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號: CN109355200A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 崔大練;馬玉心
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

本發明提供一種空柄小牛肝菌菌絲的分離純化方法，屬于野生蘑菇菌絲分離純化領域，采集空柄小牛肝菌組織或孢子在PDA培養基上進行菌絲生長，并于特色培養基培養菌絲；其中，PDA培養基組成包含松根粉，該松根粉的制備方法為：取油松或落地松根系，蒸餾水洗凈，依次用25?35%酒石酸溶液、45?50%3,4?亞甲二氧基苯酚溶液和無水乙醇超聲浸泡3?5min，然后用無菌水沖洗、烘干，粉碎磨粉，備用。本發明首次對野生的空柄小牛肝菌菌絲進行分離純化，該方法易于操作，菌絲分離成功率高、菌絲純化性高，利用分離純化的菌絲進行菌落培養，成活率及品質高，為空柄小牛肝菌培育提供了依據。

技術領域

本發明屬于野生蘑菇菌絲分離純化領域，具體涉及一種空柄小牛肝菌菌絲的分離純化方法。

背景技術

空柄小牛肝菌Boletinus cavipes(Opat.)Kalchbr.為傘菌目、牛肝菌科、小牛肝菌屬秋季于林中地上群生或叢生的野生菌。它不僅食用味道較好而且可治腰腿疼痛、手足麻木、筋絡不適等。

空柄小牛肝菌這種野生菌迄今為止未被馴化成功，雖然分布廣泛，但數量稀少，隨著人們對食用菌營養保健作用的認識使需求量日益增加。尤其是野生食用菌市場價格大幅增長，由于當地人們滅絕性的采集而逐年降低，嚴重威脅到野生物種的種質資源的保護和開發利用。但經過多年的研究發現，小牛肝菌屬野生菌菌絲純化難度極大，采用廣譜的PDA培養基多數分離的菌絲生長不強壯，因而導致研究不能繼續深入。因此，引進一種能夠更為有效、準確地對野生菌菌絲進行分離和純化的技術和方法對于小牛肝菌屬野生菌，尤其是空柄小牛肝菌物種的保存以及消費者的需求，有著重大的意義。

現有技術如授權公告號為CN 105219652 B的中國發明專利，公開了一種野生巴楚蘑菇菌絲的分離純化方法，首先將野生巴楚蘑菇組織或彈射的孢子于PDA培養基上培養6-8天獲得雜合菌絲；然后取雜合菌絲于特色培養基上培養7-10天，獲得單一的純合絲狀菌絲；挑取該純合的菌絲轉接到PDA培養基上培養6-8天即可；然而，該發明前期采用一般的PDA培養基，不利于菌絲生長，且菌絲分離成功率低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種空柄小牛肝菌菌絲的分離純化方法，該方法易于操作，菌絲分離成功率高、菌絲純化性高，利用分離純化的菌絲進行菌落培養，成活率及品質高，為空柄小牛肝菌培育提供了依據。

本發明為實現上述目的所采取的技術方案為：

一種空柄小牛肝菌菌絲的分離純化方法，包括，

消毒與無菌檢測、分離培養、菌絲純化；

具體步驟如下：

消毒與無菌檢測：

對野生空柄小牛肝菌組織或孢子進行消毒并進行無菌檢測；無菌檢測方法為：將經過消毒的菌組織或孢子置于PDA培養基平板上輕輕滾動或緊貼培養基放置1-2min，接著移去菌組織或孢子，在溫度25-27℃恒溫培養，培養5-7天，無雜菌長出即說明消毒后的菌組織或孢子表面無菌；

分離培養：

當菌組織或孢子在PDA培養基上長出菌絲時，無菌條件下挑取菌絲，接種于特色培養基平板上，25-27℃恒溫培養，培養1-2天，獲得優勢生長菌絲群；菌絲絨狀，中間略凸，呈同心圓生長，健壯，白色持續時間長；

菌絲純化：