[發明專利]用于軍團菌的增菌培養和分離培養的雙相培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201811377530.2
• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號: CN109355226A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 楊艷;蘆丹丹;楊子江
• 申請（專利權）人: 上海申啟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔;鄭暄

本發明涉及一種用于軍團菌的增菌培養和分離培養的雙相培養基，包括固體斜面培養基和液體培養基，固體斜面培養基的組分包括：N?2?乙酰胺基?2?氨基乙烷磺酸、瓊脂、氫氧化鉀、活性炭、酵母浸膏、α?酮戊二酸單甲鹽，所述的液體培養基的組分包括：N?2?乙酰胺基?2?氨基乙烷磺酸、氫氧化鉀0.1～5g、酵母浸膏、α?酮戊二酸單甲鹽、L?半胱氨酸、焦磷酸鐵、聚茴香腦磺酸鈉。本發明還涉及一種該雙相培養基的制備方法。采用本發明的用于軍團菌的增菌培養和分離培養的雙相培養基及其制備方法，能夠促進軍團菌的快速增菌培養，同時實現軍團菌的分離培養，操作簡便快捷，顯著縮短軍團菌檢測所需的培養時間，大幅度提高培養陽性率。

技術領域

本發明涉及軍團菌檢驗技術領域，特別涉及雙相培養基，具體是指一種用于軍團菌的增菌培養和分離培養的雙相培養基及其制備方法。

背景技術

軍團菌是1977年首次證實的新病原菌，廣泛分布于自然界，特別是在各種水源及空調水，管道供水系統等人工水源中。軍團菌科(Legionellaceae)僅有一個屬——軍團菌屬(Legionella)，現已有41個種屬，61個血清型，其中最重要的是嗜肺軍團菌，本菌主要引起肺炎，一旦發病或流行而未經妥善及時治療，會引起呼吸衰竭死亡，病死率很高。因此，我國對軍團菌病的防治工作十分重視。

軍團菌為革蘭氏陰性桿菌，兼性需氧，無芽孢，無夾饃，菌體大小為0.3～0.9×2～20微米，有一至數根極或次極鞭毛，本菌的生長需要半胱氨酸和鐵，利用氨基酸組喲喂能量和碳的來源，即不發酵也不氧化糖類，不還原硝酸鹽，氧化酶試驗陰性或弱陽性，觸酶試驗陽性，尿素酶陰性。本菌生長的最適pH為6.9-7.0。2％－5％CO2能促進部分菌株的生長。軍團菌生長緩慢，易于被其它菌落覆蓋。軍團菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色。

軍團菌病難以依靠臨床表現和各種臨床檢查來診斷，臨床主要是通過實驗室病原檢查分離得到軍團菌確診。同時，因其生長所需營養條件苛刻，如需要多種必須氨基酸和某些金屬離子，在含2.5～5.0％的CO2環境中方能生長出來，影響了軍團菌檢測工作的順利進行。

近幾年來，國內常用的軍團菌病的快速檢測方法有：一、免疫熒光直接法、放射免疫測定、膠乳凝集、基因探針、多聚酶鏈反應分子生物學方法，這些方法因特異性、敏感性、價格因素等，且要求操作者有一定的經驗并具有相關檢測設備，目前使用范圍受到一定限制。二、培養基細菌分離培養檢測法：藍藻培養基，硝酸鐵培養基，BCYE培養基、GVPC培養基等，其中BCYE培養基為培養軍團菌最常用培養基。細菌培養法操作簡單，特異性和敏感性強，位居軍團菌病各實驗診斷方法之首，是公認的診斷本病最可靠的方法，也是ISO指定的軍團菌檢驗方法，是軍團菌病診斷的金標準。但是BCYE培養基作為軍團菌培養的常用培養基，僅可用于軍團菌的平板分離培養，不能實現對樣本的增菌培養，導致陽性檢出率偏低，具有一定的局限性。朱慶義等發明了一種“軍團菌運送增菌培養基”(CN101921719)，具體說是公開了一種軍團菌運送增菌培養基，通過抗生素組合使用，提高了培養基對非軍團菌的抑制能力，從而提高了軍團菌的分離培養陽性率。但是該方法僅用于樣本的運送增菌培養，不能實現增菌和分離培養的雙重目的，仍需要配合使用BCYE培養基或GVPC培養基實現分離培養目的，檢驗時間較長，操作步驟繁瑣。目前尚未見專利報道可同時實現增菌培養和分離培養雙重目的軍團菌培養基。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述現有技術中的缺失，提供一種用于軍團菌的增菌培養和分離培養的雙相培養基及其制備方法。

為了實現上述目的，本發明一方面提供了一種用于軍團菌的增菌培養和分離培養的雙相培養基，其中所述的雙相培養基包括固體斜面培養基和液體培養基，所述的固體斜面培養基的組分包括：N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸、瓊脂、氫氧化鉀、活性炭、酵母浸膏、α-酮戊二酸單甲鹽，所述的液體培養基的組分包括：N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸、氫氧化鉀0.1～5g、酵母浸膏、α-酮戊二酸單甲鹽、L-半胱氨酸、焦磷酸鐵、聚茴香腦磺酸鈉。