[發(fā)明專利]用于軍團菌的增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)的雙相培養(yǎng)基及其制備方法

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• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號: CN109355226A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發(fā)明（設計）人: 楊艷;蘆丹丹;楊子江
• 申請（專利權）人: 上海申啟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔;鄭暄

1.一種用于軍團菌的增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)的雙相培養(yǎng)基，其特征在于，所述的雙相培養(yǎng)基包括固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，所述的固體斜面培養(yǎng)基的組分包括：N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸、瓊脂、氫氧化鉀、活性炭、酵母浸膏、α-酮戊二酸單甲鹽，所述的液體培養(yǎng)基的組分包括：N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸、氫氧化鉀0.1～5g、酵母浸膏、α-酮戊二酸單甲鹽、L-半胱氨酸、焦磷酸鐵、聚茴香腦磺酸鈉。

2.根據(jù)權利要求1所述的用于軍團菌的增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)的雙相培養(yǎng)基，其特征在于，所述的固體斜面培養(yǎng)基包括如下重量配比的組分：N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸1～10g，氫氧化鉀0.1～5g，活性炭0.1～5g，酵母浸膏0.5～5g，瓊脂5-10g，α-酮戊二酸單甲鹽0.1～5g，純化水350mL；

所述的液體培養(yǎng)基包括如下重量配比的組分：N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸1～10g，氫氧化鉀0.1～5g，酵母浸膏0.5～5g，α-酮戊二酸單甲鹽0.5～5g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.2～5g，焦磷酸鐵0.1～5g，聚茴香腦磺酸鈉0.1～10g，純化水600mL。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的用于軍團菌的增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)的雙相培養(yǎng)基，其特征在于，所述的固體斜面培養(yǎng)基包括如下重量配比的組分：以350mL體積計算，N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸3.5g，氫氧化鉀0.95g，活性炭2g，酵母浸膏3.5g，瓊脂7.0g，α-酮戊二酸單甲鹽0.5g；

所述的液體培養(yǎng)基包括如下重量配比的組分：以600mL體積計算，N-2-乙酰胺基-2-氨基乙烷磺酸6.0g，氫氧化鉀1.5g，酵母浸膏6.2g，α-酮戊二酸單甲鹽0.6g，聚茴香腦磺酸鈉0.18g，L-半胱氨酸0.4g，焦磷酸鐵0.16g。

4.一種用于制備權利要求1所述的用于軍團菌的增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)的雙相培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟：

(1)、分別稱量固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基所需原料；

(2)、將固體斜面培養(yǎng)基的原料混合，并分裝至第一培養(yǎng)瓶中，高壓滅菌；

(3)、在所述的第一培養(yǎng)瓶底部形成和凝固成斜面，制成所述的固體斜面培養(yǎng)基；

(4)、將液體斜面培養(yǎng)基的原料混合，并分裝至第二培養(yǎng)瓶中，制成所述的液體培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權利要求4所述的用于制備所述的用于軍團菌的增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)的雙相培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述的步驟(2)具體包括：向固體斜面培養(yǎng)基原料中加入350mL純化水，充分混勻并煮沸溶解，調(diào)整pH為6.9～7.0，分裝至第一培養(yǎng)瓶中，121℃高壓滅菌15分鐘；

所述的步驟(4)具體包括：將ACES加到裝有600mL蒸餾水的燒瓶中，在50℃水浴中加熱到溶解，加入氫氧化鉀、酵母浸膏、SPS以及α-酮戊二酸單甲鹽，121℃高壓滅菌15分鐘，加入過濾滅菌后的L-半胱氨酸鹽酸鹽和焦磷酸鐵，調(diào)整pH為6.9～7.0。