[發(fā)明專利]一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811375712.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109507122A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾祥;劉冬玲;吳衛(wèi)東;高麗云;趙香梅;桂立輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N33/50
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

本發(fā)明公開(kāi)的屬于污染檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法，該多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法包括如下步驟：S1：樣品采集；S2：樣品處理：將樣品剪成等面積的碎片，置于錐形瓶中，用正己烷和乙醚進(jìn)行超聲波抽取1?3次，每次抽取時(shí)間為15?25分鐘，合并提取液，過(guò)濾，然后濃縮，分離出多環(huán)芳烴；S3：滴注；S4：檢測(cè)，該發(fā)明提出的一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法，能夠準(zhǔn)確的判斷出不同粒徑的多環(huán)芳烴在人體呼吸系統(tǒng)上的沉積量，從而便于對(duì)多環(huán)芳烴排放的管理，除了控制多環(huán)芳烴總排放量外，還需要控制不同粒徑的多環(huán)芳烴的排放，該發(fā)明便于操作，為污染管理具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及污染檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

多環(huán)芳烴是煤，石油，木材，煙草，有機(jī)高分子化合物等有機(jī)物不完全燃燒時(shí)產(chǎn)生的揮發(fā)性碳?xì)浠衔铮侵匾沫h(huán)境和食品污染物。迄今已發(fā)現(xiàn)有200多種PAHs,其中有相當(dāng)部分具有致癌性，如苯并α芘，苯并α蒽等。PAHs廣泛分布于環(huán)境中，可以在我們生活的每一個(gè)角落發(fā)現(xiàn)，任何有有機(jī)物加工，廢棄，燃燒或使用的地方都有可能產(chǎn)生多環(huán)芳烴。多環(huán)芳烴是人類最早發(fā)現(xiàn)的化學(xué)致癌物，它可誘發(fā)人呼吸系統(tǒng)癌癥，故，了解它對(duì)人體的呼吸系統(tǒng)的影響將有助于深入探討其對(duì)人體的危害，現(xiàn)有的多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法操作復(fù)雜，檢測(cè)數(shù)據(jù)不全面，無(wú)法獲取不同直徑的多環(huán)芳烴對(duì)人體呼吸系統(tǒng)的影響數(shù)據(jù)，為此，我們提出一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的現(xiàn)有的多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法操作復(fù)雜，檢測(cè)數(shù)據(jù)不全面，無(wú)法獲取不同直徑的多環(huán)芳烴對(duì)人體呼吸系統(tǒng)的影響數(shù)據(jù)的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法，該多環(huán)芳烴對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響檢測(cè)方法包括如下步驟：

S1：樣品采集：采用DFJ-1型五段沖擊分級(jí)采樣器采集室內(nèi)的空氣顆粒物，所采集的顆粒物各級(jí)空氣動(dòng)力學(xué)直徑分別為＞7μm、3.3-7μm、2-3.3μm、1.1-2μm和＜1.1μm，將濾紙進(jìn)行預(yù)處理，然后后密封，用低溫冰箱冷藏；

S2：樣品處理：將樣品剪成等面積的碎片，置于錐形瓶中，用正己烷和乙醚進(jìn)行超聲波抽取1-3次，每次抽取時(shí)間為15-25分鐘，合并提取液，過(guò)濾，然后濃縮，分離出多環(huán)芳烴；

S3：滴注：取42只小鼠隨機(jī)分為七組，先用麻醉劑麻醉，進(jìn)行透視燈下氣管滴注，然后編號(hào)1-7，編號(hào)1不做任何處理，編號(hào)2每只滴注50-60μL無(wú)菌PBS，編號(hào)3-7分別滴注經(jīng)過(guò)步驟S2處理的空氣動(dòng)力學(xué)直徑分別為＞7μm、3.3-7μm、2-3.3μm、1.1-2μm和＜1.1μm的多環(huán)芳烴濃縮液50-60的μL，每周滴注2-3次，連續(xù)滴注3-4周；

S4：檢測(cè)：最后依次滴注24小時(shí)后處死小鼠，檢測(cè)肺泡灌洗液中炎性因子IL-1和IL-6的水平，縱膈淋巴結(jié)中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比例變化，縱膈淋巴結(jié)中Th17和Treg細(xì)胞比例的變化；觀察肝臟和脾臟臟器系數(shù)和肺臟病理改變并計(jì)算肺臟質(zhì)量與體重比值，同時(shí)取右下肺組織投入10％福爾馬林固定、石蠟包埋用于病理觀察；將其余左肺用錫紙包裹，投入液氮中保存?zhèn)溆茫淮笫笞蠓谓M織中結(jié)締生長(zhǎng)因子(CTGF)的表達(dá)：參照免疫組織化試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，CTGF體積稀釋度1:200，利用圖像采集系統(tǒng)操作，隨機(jī)取每張照片中的5個(gè)視野進(jìn)行積分光密度值的測(cè)定，取平均值作為標(biāo)本值；CTGF的體積稀釋度1:1000，甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)體積稀釋度1:2000，最后用ChemiDocMP成像分析系統(tǒng)采集圖像，用積分吸光度比值(CTGF/GAPDH)作為其相對(duì)表達(dá)量。

優(yōu)選的，所述步驟S1中的采樣時(shí)間為23-25小時(shí)，采樣期間空氣的流量為25-27L/min。

優(yōu)選的，所述步驟S1中的濾紙為在410-420攝氏度灼燒4-4.8小時(shí)的石英濾膜。