[發明專利]一種多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法

在審

• 申請號: 201811375712.6
• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號: CN109507122A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 曾祥;劉冬玲;吳衛東;高麗云;趙香梅;桂立輝
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/50
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

1.一種多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法，其特征在于：該多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法包括如下步驟：

S1：樣品采集：采用DFJ-1型五段沖擊分級采樣器采集室內的空氣顆粒物，所采集的顆粒物各級空氣動力學直徑分別為＞7μm、3.3-7μm、2-3.3μm、1.1-2μm和＜1.1μm，將濾紙進行預處理，然后后密封，用低溫冰箱冷藏；

S2：樣品處理：將樣品剪成等面積的碎片，置于錐形瓶中，用正己烷和乙醚進行超聲波抽取1-3次，每次抽取時間為15-25分鐘，合并提取液，過濾，然后濃縮，分離出多環芳烴；

S3：滴注：取42只小鼠隨機分為七組，先用麻醉劑麻醉，進行透視燈下氣管滴注，然后編號1-7，編號1不做任何處理，編號2每只滴注50-60μL無菌PBS，編號3-7分別滴注經過步驟S2處理的空氣動力學直徑分別為＞7μm、3.3-7μm、2-3.3μm、1.1-2μm和＜1.1μm的多環芳烴濃縮液50-60的μL，每周滴注2-3次，連續滴注3-4周；

S4：檢測：最后依次滴注24小時后處死小鼠，檢測肺泡灌洗液中炎性因子IL-1和IL-6的水平，縱膈淋巴結中CD4+T細胞和CD8+T細胞比例變化，縱膈淋巴結中Th17和Treg細胞比例的變化；觀察肝臟和脾臟臟器系數和肺臟病理改變并計算肺臟質量與體重比值，同時取右下肺組織投入10％福爾馬林固定、石蠟包埋用于病理觀察；將其余左肺用錫紙包裹，投入液氮中保存備用；大鼠左肺組織中結締生長因子(CTGF)的表達：參照免疫組織化試劑盒說明書進行操作，CTGF體積稀釋度1:200，利用圖像采集系統操作，隨機取每張照片中的5個視野進行積分光密度值的測定，取平均值作為標本值；CTGF的體積稀釋度1:1000，甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)體積稀釋度1:2000，最后用ChemiDocMP成像分析系統采集圖像，用積分吸光度比值(CTGF/GAPDH)作為其相對表達量。

2.根據權利要求1所述的一種多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法，其特征在于：所述步驟S1中的采樣時間為23-25小時，采樣期間空氣的流量為25-27L/min。

3.根據權利要求1所述的一種多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法，其特征在于：所述步驟S1中的濾紙為在410-420攝氏度灼燒4-4.8小時的石英濾膜。

4.根據權利要求1所述的一種多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法，其特征在于：所述步驟S2中的正己烷和乙醚之間的體積比為9:1。

5.根據權利要求1所述的一種多環芳烴對呼吸系統的影響檢測方法，其特征在于：所述步驟S3中的麻醉劑為5％水合氯醛，所述麻醉劑的用量為小鼠體重的1％。