[發(fā)明專利]一種從煙草突變體中篩選高分泌型材料的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811374489.3
• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN109220786A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪君;崔紅;楊永鋒;王召軍;孫計(jì)平;孫煥;平文麗;楊欣玲;婁亞楠;李芳芳;李耀宇;丁燕芳
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所
• 主分類號(hào): A01H1/04
• 分類號(hào): A01H1/04;A01H1/06
• 代理公司: 鄭州博派知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 41137
• 代理人: 方燕玉

本發(fā)明公開了一種從煙草突變體庫中篩選高分泌型材料的方法，包括以下步驟：步驟1、種子處理；步驟2、突變?nèi)后w的初步篩選；步驟3、單株篩選鑒定；步驟4、重復(fù)鑒定（F2代鑒定）；步驟5、品系鑒定。本發(fā)明在鑒定初期，利用腺毛密度和類型與葉面分泌物的相關(guān)性，先進(jìn)行直觀的葉面腺毛的密度和類型的篩選，再在此基礎(chǔ)上進(jìn)行葉面分泌物的鑒定和高分泌型材料的篩選，篩選結(jié)果準(zhǔn)確可靠，在幼苗期就淘汰了90%以上的突變體植株，大大減少了大田材料的種植量，減少了用地、用工等費(fèi)用，因種植材料的減少，也減少了成熟期分泌物鑒定的數(shù)量，節(jié)約了大量成本，縮短了篩選時(shí)間，大大提高了篩選效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從煙草突變體中篩選高分泌型材料的方法。

背景技術(shù)

煙草葉面分泌物與煙葉的品質(zhì)和抗性密切相關(guān)。葉面分泌物含量高的品種煙株抗性強(qiáng)、煙葉油分多，品質(zhì)好，評(píng)吸質(zhì)量較好。隨著吸煙與健康問題的關(guān)注度提高，降焦減害顯得日益重要，對煙葉的品質(zhì)要求也越來越高。為了提升煙葉的品質(zhì)，增加品種抗性，提高葉面分泌物含量是一條非常有效的途徑。

研究發(fā)現(xiàn)，對煙草來說，腺毛密度和腺毛類型與葉面分泌物含量的多少密切相關(guān)。腺毛密度越大，尤其是分泌型腺毛密度越大，葉面分泌物含量越高。而高分泌型材料的創(chuàng)制，常規(guī)的品種選育很難達(dá)到目的，目前應(yīng)用較多的是通過物理、化學(xué)等方法進(jìn)行誘變，在誘變材料中篩選目標(biāo)性狀。由于誘變材料突變頻率低且突變的隨機(jī)性很強(qiáng)，符合目標(biāo)性狀的材料非常少，要想得到目標(biāo)性狀需要在大批的材料中篩選。高分泌型材料一般的篩選方法是對所有處理過的單株種植并逐個(gè)進(jìn)行分泌物提取鑒定，但大批量的材料種植和葉面分泌物提取、分離、檢測等，費(fèi)時(shí)費(fèi)力、成本非常高、工作量非常大。因此，找到一種簡單有效的篩選方法，從而減少工作量，降低成本，提高篩選效率具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有的高分泌型煙草材料創(chuàng)制主要采用對誘變后代全部種植并對逐個(gè)葉面分泌物進(jìn)行提取鑒定，篩選工作量大，成本高，效率較低的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種從煙草突變體中篩選高分泌型材料的方法，可以大大減少篩選工作量，節(jié)約成本，提高篩選效率。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種從煙草突變體庫中篩選高分泌型材料的方法，主要選育流程為：種子處理（物理化學(xué)誘變）→突變?nèi)后w的初步篩選→單株篩選鑒定→重復(fù)鑒定（F2代鑒定）→品系鑒定→生產(chǎn)試驗(yàn)。

其中，包括以下步驟：

步驟1、種子處理：應(yīng)用物理或化學(xué)的方法，對已知特性的煙草種子進(jìn)行處理，達(dá)到誘變的目的；

步驟2、突變?nèi)后w的初步篩選：將處理過的種子點(diǎn)播在裝有合適基質(zhì)的育苗盤上，單粒點(diǎn)播，在適宜溫度下，進(jìn)行漂浮育苗；待長到5-7片葉時(shí)，對幼苗的葉片進(jìn)行腺毛形態(tài)學(xué)觀察；篩選出與野生型相比腺頭大及腺毛密度明顯增加的材料，同時(shí)對剪取的單株進(jìn)行標(biāo)記，或直接移植到一個(gè)新的漂盤上，此過程可以淘汰90%以上的幼苗；

步驟3、單株篩選鑒定：對苗期篩選出的目標(biāo)材料在大田進(jìn)行單株種植，同時(shí)種植野生型對照。煙葉成熟期時(shí)，對葉面腺毛進(jìn)行染色觀察，重復(fù)鑒定可分泌型腺毛的密度，并對中部葉按照標(biāo)準(zhǔn)方法提取葉面分泌物，進(jìn)行相關(guān)成分的檢測，根據(jù)檢測結(jié)果，保留葉面分泌物含量較高的材料，單株編號(hào)，套袋留種；

步驟4、重復(fù)鑒定（F2代鑒定）：將F2代種子種植，大田生長期淘汰重病株和弱小煙株，選擇健壯的株系，在煙葉成熟期時(shí)，進(jìn)行葉面分泌物提取鑒定；并對其形態(tài)特征、農(nóng)藝性狀、抗病性等進(jìn)行自然選擇，單株系套袋留種，盡可能得到更多變異類型的植株；

步驟5、品系鑒定：對F2代得到的材料進(jìn)行品系比較試驗(yàn)，對選出的穩(wěn)定品系進(jìn)行生產(chǎn)可用性比較評(píng)價(jià)，確定目標(biāo)高分泌型材料。

優(yōu)選地，步驟1中用甲基磺酸乙酯（EMS）、硫酸二乙酯（DES）、快中子中任一種對煙草種子進(jìn)行處理。