[發明專利]一種檢測葛根中生物胺的方法

在審

• 申請號: 201811372977.0
• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號: CN109541058A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 吳玉杰;蔡翔宇;江思華
• 申請（專利權）人: 廣西出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06
• 代理公司: 東營雙橋專利代理有限責任公司 37107
• 代理人: 劉東亮

1.一種檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，包括如下步驟：

第1步，生物胺單標溶液的配制：準確稱量腐胺、組胺、酪胺、精胺、亞精胺、苯乙胺、章胺、尸胺、色胺的標準品，放入容量瓶；加入鹽酸定容；配制成標準儲備溶液；

第2步，生物胺混合標準溶液的配制：分別取等量的第1步中得到的各個標準品的標準儲備溶液，混合之后，用鹽酸定容，配制成生物胺混合原液；

第3步，生物胺混合工作液的配制：將生物胺混合原液用水稀釋后制成設定濃度的溶液，作為生物胺混合工作液；

第4步，生物胺標準溶液衍生化：取0.5-2mL的生物胺混合工作液移入15mL離心管中，然后加入1.5 mL飽和碳酸鈉溶液和1 mL丹磺酰氯溶液；蓋上蓋子后，在40℃的溫度控制的動篩中放置和振搖1小時，然后加入100μL的氨水終止反應；加入乙腈將體積調節到5 mL，在4000r/min下進行5分鐘的離心，最后用0.22μm的過濾器過濾上清液；

第5步，樣品溶液的制備：取待檢測的葛根樣品，加入鹽酸溶液進行提取，再在冷凍離心中進行離心，取上清；將上清中加入飽和碳酸氫鈉溶液和丹磺酰氯化物溶液，在搖床上放置和搖動，加入氨水中止反應，反應液加乙腈稀釋，作為樣品溶液；

第6步，UPLC檢測：采用第4步得到的衍生化生物胺標準溶液以及第5步得到的標準溶液，通過UPLC檢測，通過外標法得到待測的生物胺的含量。

2.根據權利要求1所述的檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，所述的第1步中，各個標準儲備溶液的濃度為1 mg/mL；鹽酸溶液的濃度0.1 mol/L。

3.根據權利要求1所述的檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，所述的第2步中，鹽酸溶液的濃度0.1 mol/L；生物胺混合原液的濃度100μg/ml。

4.根據權利要求1所述的檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，所述的第4步中，丹磺酰氯溶液是指濃度為10mg/mL的丙酮溶液。

5.根據權利要求1所述的檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，所述的第5步中，鹽酸溶液的濃度是0.4mol/L。

6.根據權利要求1所述的檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，所述的第6步中，UPLC中的色譜柱是UPLC BEH C18柱，UPLC柱的溫度設定在35℃，流動相以0.4mL/min的速率泵送；采用PDA檢測器在254nm波長下測定9種生物胺。

7.根據權利要求1所述的檢測葛根中生物胺的方法，其特征在于，所述的第6步中，流動相A為5mmol/L乙酸銨，流動相B為乙腈；梯度洗脫如下所示：

。