[發明專利]一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株及其應用

在審

• 申請號: 201811367703.2
• 申請日: 2018-11-16
• 公開（公告）號: CN109517776A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 吳同壘;史秋梅;張志強;于秀劍;杜萬年;柳翠翠;高桂生
• 申請（專利權）人: 河北科技師范學院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A61K39/112;A61P31/04;C12R1/42
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

本發明公開了一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株及其應用，其中腸炎沙門菌icdA基因缺失株的構建方法，包括一次重組菌株腸炎沙門菌c50336::cat的構建和二次重組菌株腸炎沙門菌c50336ΔicdA的構建。本發明提供了一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株的構建方法，該方法通過構建腸炎沙門菌icdA基因缺失株，并對其生物學特性和毒力進行研究,用以系統評估icdA基因對腸炎沙門菌毒力的影響，明確了icdA基因缺失引起腸炎沙門菌毒力下降，為腸炎沙門菌疫苗研究，進而防治腸炎沙門菌感染提供參考。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體的說是涉及一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株及其應用。

背景技術

沙門菌(Salmonella)是一種全球性的食源性致病菌，雞肉、蛋和相關產品是沙門菌的主要攜帶者，主要通過糞口途徑傳染人和其他哺乳動物。沙門菌血清型眾多，達到2600余種，其中腸炎沙門菌(Salmonella enterica serovarEnteritidis)是引起人類和畜禽沙門菌病的主要成員。腸炎沙門菌通過水平傳播和垂直傳播兩種方式傳播，引起雞沙門菌病，也可引起人類的腸胃炎和食物中毒。世界范圍內，每年因沙門菌導致的食物中毒造成大約155000人死亡。

腸炎沙門菌為兼性胞內寄生菌，能夠在宿主細胞中存活并增殖。由于生物膜的選擇性通過，普通藥物難以大量進入細胞，徹底殺死病原菌。icdA基因編碼異檸檬酸脫氫酶(Isocitrate dehydrogenase，IDH)，它在呼吸鏈的三羧酸循環(Tricarboxylic AcidCycle，TCA)中發揮重要作用，研究顯示其在沙門菌侵入的巨噬細胞中高表達。同時，對結核分枝桿菌、幽門螺桿菌和遲緩愛德華菌的研究發現IDH能夠顯著激活宿主的免疫反應。因此，推測IDH與沙門菌的抗應激能力、胞內存活能力和毒力密切相關。

因此，建立一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株的構建方法，構建腸炎沙門菌icdA基因缺失株，并對其生物學特性進行研究，為探索腸炎沙門菌icdA基因缺失株的生理學功能提供基礎和應用方向是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株的構建方法，該方法通過構建腸炎沙門菌icdA基因缺失株，并對其生物學特性和毒力進行研究,用以系統評估icdA基因對腸炎沙門菌毒力的影響，明確了icdA基因缺失引起腸炎沙門菌毒力下降，為腸炎沙門菌疫苗研究，進而防治腸炎沙門菌感染提供參考。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株在降低腸炎沙門菌毒力中的應用。

一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株在開發腸炎沙門菌疫苗中的應用。

一種腸炎沙門菌icdA基因缺失株的構建方法，包括如下步驟：

(1)一次重組菌株腸炎沙門菌c50336::cat的構建

以質粒pKD3為模板制備氯霉素目的基因片段，以攜帶質粒pKD46的腸炎沙門菌c50336制備感受態細胞，將所述氯霉素目的基因片段和所述感受態細胞混合電擊轉化，復壯后涂布氯霉素平板，培養24-48h，挑取陽性菌，去除質粒pKD46，獲得腸炎沙門菌c50336::cat；

優選的，所述氯霉素目的基因片段和所述感受態細胞混合電擊轉化方法為：將所述氯霉素目的基因片段和所述感受態細胞加入電擊杯中，使用電轉儀在1.8kV電擊轉化；

優選的，復壯培養的方法為：將所述氯霉素目的基因片段和所述感受態細胞混合電擊轉化后，加入LB液體培養基(胰蛋白胨1％，氯化鈉1％，酵母提取物0.5％)混勻吸取1.5mL至EP管中，30℃，180rpm/min復壯培養30min后加入終濃度30mmol/L的L-阿拉伯糖，繼續培養4h。

(2)二次重組菌株腸炎沙門菌c50336ΔicdA的構建