[發(fā)明專利]一種人乳中的功能組分及其制備和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811366120.8
• 申請(qǐng)日: 2018-11-16
• 公開（公告）號(hào): CN111196827A
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁鑫淼;閆競(jìng)宇;郭志謀;吉素志;張?chǎng)╂?/a>;屠文娟;李佳齊;金高娃
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C07H3/06
• 分類號(hào): C07H3/06;C07H1/00;A61P1/00
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種人乳中的功能組分，其特征在于：含有唾液酸的游離寡糖混合物，唾液酸的游離寡糖其化學(xué)結(jié)構(gòu)由以下單糖通過不同的組合和連接方式構(gòu)成：

游離寡糖中包括：D-葡萄糖(Glc)、D-半乳糖(Gal)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和N-乙酰神經(jīng)氨酸(唾液酸,Neu5Ac)和巖藻糖(Fuc)；

該組分包含的主要成分有：

3’-Sialyllactose(3’-SL)：Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc

6’-Sialyllactose(6’-SL)：Neu5Acα2-6Galβ1-4Glc

3F-3’-SL：Neu5Acα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc

LST-a：Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc

LST-b：Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc

LST-c：Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc

DS-LNT：Neu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc。

2.按照權(quán)利要求1所述人乳中的功能組分，其中所包含的主要成分有：3’-SL、6’-SL、LST-a、LST-b、LST-c、DSLNT、6’-SLNFP VI等，將人乳中的功能組分中3’-SL的量定為1，則該組分中6’-SL的相對(duì)含量在0.1-5.0、3F-3’-SL的相對(duì)含量在0.1-2、LST-a的相對(duì)含量在0.01-0.5、LST-b的相對(duì)含量在0.01-0.5、LST-c的相對(duì)含量在0.1-1、DSLNT的相對(duì)含量在0.1-2、6’-SLNFP V的相對(duì)含量在0.01-0.5之間。

3.一種人乳中的功能組分的制備方法，其特征是：人乳樣品經(jīng)過低溫離心脫脂、過膜除蛋白、柱色譜分離，最終獲得所需的功能組分。

4.按照權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是：低溫離心脫脂步驟為：取人乳樣品，于0-10℃條件下，500-50000g離心5-500分鐘，除去上層脂質(zhì)，離心1-5次后，取下層既得脫脂人乳樣品。

5.按照權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是：過膜除蛋白步驟為：取脫脂人乳樣品，加入0-5倍體積量的水溶解到脫脂人乳樣品中，混勻，過膜，收集透過液，得到脫脂除蛋白的乳清液，過膜的材料可選擇中空纖維膜、板框式膜包中的一種或兩種，膜截留分子量為5-100kD。

6.按照權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是：柱色譜分離得到酸性寡糖的步驟為：取脫脂除蛋白樣品，體積濃度20-80％有機(jī)溶劑水溶液溶解樣品，樣品經(jīng)液相色譜方法進(jìn)行分離，以親水性填料為色譜柱固定相，以水和有機(jī)溶劑、或緩沖鹽水溶液和有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，使用等度或梯度方法進(jìn)行洗脫；

柱色譜分離得到酸性寡糖過程樣品溶解液為有機(jī)溶劑甲醇、乙腈、乙醇、丙酮中的一種或兩種以上，樣品濃度為0.1-500mg/mL；親水性填料為硅膠、兩性離子、氨基或酰胺基等修飾的硅膠或聚合物，洗脫液中的有機(jī)溶劑有：甲醇，乙腈，乙醇，異丙醇，丙酮中的一種或幾種。

7.按照權(quán)利要求6所述的制備方法，所選擇緩沖鹽類型及其于流動(dòng)相中的濃度及pH如下：

a)甲酸銨緩沖鹽，濃度0-200mM，pH 2.0-7.0；

b)乙酸銨緩沖鹽，濃度0-200mM，pH 2.0-7.0；

c)碳酸氫銨緩沖鹽，濃度0-200mM，pH 6.0-9.0；

使用等度方法進(jìn)行洗脫：流動(dòng)相中水或緩沖鹽水溶液與有機(jī)溶劑按體積比例為5/95～95/5作為洗脫液；

或使用線性梯度方法進(jìn)行洗脫：流動(dòng)相中水或緩沖鹽水溶液的體積濃度從小到大變化，起始體積濃度為5-60％，終止體積濃度為40-95％；

或使用臺(tái)階梯度方法進(jìn)行洗脫：按流動(dòng)相中水或緩沖鹽水溶液的體積比例從5％～95％中從小至大隨機(jī)選取2個(gè)以上進(jìn)行洗脫操作。