[發明專利]一種混合菌發酵生產L-哌啶甲酸的方法有效
| 申請號： | 201811365167.2 | 申請日： | 2018-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN109337942B | 公開（公告）日： | 2020-10-23 |
| 發明（設計）人： | 陳可泉;劉易辰;應晗笑;王昕;歐陽平凱 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學 |
| 主分類號： | C12P17/12 | 分類號： | C12P17/12;C12N15/70;C12N15/60 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 胡建華 |
| 地址： | 210009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 混合 發酵 生產 哌啶 甲酸 方法 | ||
1.一種混合菌發酵生產L-哌啶甲酸的方法，其特征在于，以產賴氨酸的菌株和過表達賴氨酸環化脫氨酶的菌株共同作為發酵菌株發酵生產L-哌啶甲酸；
其中，
所述產賴氨酸的菌株為導入了氨芐青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因的CCTCC NO.M 2013239菌株；
所述過表達賴氨酸環化脫氨酶的菌株的構建方法如下：
將賴氨酸環化脫氨酶基因克隆到表達質粒中，得到重組質粒，將重組質粒與pGro7質粒共同轉化宿主菌，得到過表達賴氨酸環化脫氨酶的菌株，所述表達質粒為pET28a，所述的宿主菌為
2.根據權利要求1所述混合菌發酵生產L-哌啶甲酸的方法，其特征在于，所述發酵生產L-哌啶甲酸，其發酵培養基包括如下組分：
葡萄糖1~50g/L、硫酸銨1~10g/L、硫酸亞鐵0~2g/L，酵母粉1~3g/L、蛋白胨3~10g/L、氯化鉀0.1~1.0g/L、七水硫酸鎂0.5~2.0g/L、維生素B1 30~100mg/L。
3.根據權利要求1所述混合菌發酵生產L-哌啶甲酸的方法，其特征在于，所述產賴氨酸的菌株和過表達賴氨酸環化脫氨酶的菌株的DCW比例為3:1~1:3。
4.根據權利要求1所述混合菌發酵生產L-哌啶甲酸的方法，其特征在于，發酵生產L-哌啶甲酸的方法包括如下步驟：
(1) 分別活化產賴氨酸的菌株和過表達賴氨酸環化脫氨酶的菌株，將產賴氨酸的菌株和過表達賴氨酸環化脫氨酶的菌株按照DCW比例為3:1~1:3接種到發酵培養基中；
(2) 加入誘導劑，誘導賴氨酸環化脫氨酶表達；誘導條件為18~30°C，100~400rpm；
(3) 發酵生產L-哌啶甲酸，發酵條件為25-47°C，100~400rpm。
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