[發明專利]循環microRNAs檢測試劑盒和特異性檢測循環microRNAs的方法及應用

有效

• 申請號: 201811360587.1
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN109251964B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 葉家嘉;毛瑜;陳妍;孫欽升;李露露
• 申請（專利權）人: 深圳市乾康醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

本發明屬于生物技術領域，涉及一種循環microRNAs檢測試劑盒和特異性檢測循環microRNAs的方法及應用。該試劑盒包括：具有粘性末端的發卡結構DNA，其一部分與目標microRNA的至少一部分互補配對；雙鏈特異性核酸酶及反應緩沖液；環狀DNA探針，其一部分與發卡結構DNA的一部分互補配對；任選的以下組份之一：SYBR Gold熒光核酸染料；DNA聚合酶；DNA聚合酶反應緩沖液；4×dNTPs。本發明采用雙鏈特異性核酸酶介導的靶標循環反應和滾環擴增反應對循環miRNAs進行特異性檢測，既可以降低檢測背景又可以起到雙向信號放大的作用，具有操作簡單、檢測快速，靈敏度高、特異性好和成本低等特點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，涉及一種循環microRNAs檢測試劑盒，一種特異性檢測循環microRNAs的方法，及它們在檢測循環microRNAs中的應用。

背景技術

循環microRNAs(miRNAs)是一類長約19-23nt，內源性，非編碼，存在于血清、血漿或尿液等體液中的細胞外游離狀態的miRNAs，它通過與其靶mRNA分子的3’端非編碼區(3’UTR)互補結合，在翻譯水平上調控基因的表達，因此miRNAs廣泛參與了生物體多種生理過程，如個體發育，細胞增殖、分化和凋亡，代謝與應激反應的調節，甚至疾病發生，包括腫瘤形成。miRNAs還參與了腫瘤細胞重要的生物程序調控，間接地起著促癌基因和抑癌基因的功能，在腫瘤的發生和發展中起了至關重要的作用，因此miRNAs被視為腫瘤早期診斷、預后和治療的重要潛在生物標記物和靶標。

循環miRNAs具有短序列、高同源、低含量和極易降解的特性，因此在生物醫學研究和早期臨床診斷方面急需高效，特異的miRNAs檢測方法。

傳統的miRNAs的檢測方法主要有Northern blot，微陣列和實時熒光定量PCR(real-time PCR)，這些檢測方法不僅需要使用大型昂貴的儀器設備，操作繁瑣，而且靈敏度低，特異差，因此很難普及。

因此，亟需開發一種新的檢測循環microRNAs的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種循環microRNAs檢測試劑盒和特異性檢測循環microRNAs的方法及應用。在基于SYBR Gold熒光核酸染料的條件下，采用雙鏈特異性核酸酶介導的靶標循環反應和滾環擴增反應對循環miRNAs進行特異性檢測，既可以降低檢測背景又可以起到雙向信號放大的作用，具有操作簡單、檢測快速，靈敏度高、特異性好和成本低等特點。

為了實現上述目的，本發明的第一方面提供一種循環microRNAs檢測試劑盒，該循環microRNAs檢測試劑盒包括以下組份：

(1)具有粘性末端的發卡結構DNA，所述發卡結構DNA的一部分與目標microRNA的至少一部分互補配對；所述互補配對使得發卡結構DNA展開，與目標microRNA形成miRNA-DNA雜交體；

(2)雙鏈特異性核酸酶及雙鏈特異性核酸酶反應緩沖液；

(3)環狀DNA探針，所述環狀DNA探針的一部分與發卡結構DNA的一部分互補配對；

(4)任選的以下組份之一：

(4-1)SYBR Gold熒光核酸染料；

(4-2)DNA聚合酶；

(4-3)DNA聚合酶反應緩沖液；

(4-4)4×dNTPs。

本發明試劑盒中上述組分可單獨提供，也可根據需要將部分組分以混合物形式提供。