[發明專利]循環microRNAs檢測試劑盒和特異性檢測循環microRNAs的方法及應用

有效

• 申請號: 201811360587.1
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN109251964B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 葉家嘉;毛瑜;陳妍;孫欽升;李露露
• 申請（專利權）人: 深圳市乾康醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

1.一種循環microRNAs檢測試劑盒，其特征在于，該循環microRNAs檢測試劑盒包括以下組份：

(1)具有粘性末端的發卡結構DNA，所述發卡結構DNA的長粘性末端開始的一部分與目標microRNA完全互補配對；所述互補配對使得發卡結構DNA展開，與目標microRNA形成miRNA-DNA雜交體；

(2)雙鏈特異性核酸酶及雙鏈特異性核酸酶反應緩沖液；

(3)環狀DNA探針，所述環狀DNA探針的一部分與發卡結構DNA短粘性末端的一部分互補配對；

(4)任選的以下組份之一：

(4-1)SYBR Gold熒光核酸染料；

(4-2)DNA聚合酶；

(4-3)DNA聚合酶反應緩沖液；

(4-4)4×dNTPs。

2.根據權利要求1所述的循環microRNAs檢測試劑盒，其中，所述發卡結構DNA的長粘性末端的一部分與目標microRNA的至少一部分互補配對的堿基個數為15-24。

3.根據權利要求1所述的循環microRNAs檢測試劑盒，其中，所述發卡結構DNA以發卡結構DNA的緩沖液的形式提供，其濃度為1nM-100nM；

所述環狀DNA探針以環狀DNA探針的滾環擴增反應液的形式提供，其濃度為1nM-100nM。

4.根據權利要求1所述的循環microRNAs檢測試劑盒，其中，所述目標microRNA具有如SEQ ID NO：1所示序列；所述發卡結構DNA具有如SEQ ID NO：2所示序列；所述環狀DNA探針具有如SEQ ID NO：3所示序列。

5.一種特異性檢測循環microRNAs的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1)將待測物與發卡結構DNA混合，加入雙鏈特異性核酸酶，進行酶解反應；

2)向酶解反應產物中加入環狀DNA探針，進行滾環擴增；

3)檢測滾環擴增產物；

其中，

所述發卡結構DNA具有粘性末端，所述發卡結構DNA的長粘性末端開始的一部分與目標microRNA完全互補配對；所述互補配對使得發卡結構DNA展開，與目標microRNA形成miRNA-DNA雜交體；

所述環狀DNA探針的一部分與發卡結構DNA短粘性末端的一部分互補配對。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，利用SYBR Gold熒光核酸染料檢測滾環擴增產物。

7.根據權利要求5所述的方法，其中，所述發卡結構DNA的長粘性末端的一部分與目標microRNA的至少一部分互補配對的堿基個數為15-24。