[發明專利]一種茶樹菇菌種工廠化生產方法

在審

• 申請號: 201811356966.3
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN109479622A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 佟曉娜;王麗;張博
• 申請（專利權）人: 江蘇強農農業技術服務有限公司
• 主分類號: A01G18/20
• 分類號: A01G18/20;A01G18/50;A01G18/40;A01G18/00
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 趙登高

1.一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1）菌株的活化

選取茶樹菇優質菌株，將低溫保藏的菌株劃線接種到PDA培養基平皿上，在20-25℃的恒溫培養箱中培養5-7d，使其恢復活性；

2）斜面菌種的制備

挑選上述平皿上生長良好的菌落，在超凈工作臺中接種到徹底滅菌的斜面培養基上，在 25℃的恒溫培養箱中培養，至菌絲延伸至整個斜面；

3）斜面菌種的磁場處理

挑選菌絲粗壯、濃密、且無污染的斜面菌種，放置在磁場強度為50mT的均勻磁場中處理20~30min；

4）搖瓶菌種的制備

從1個斜面中挑取3塊約1.0cm²的菌塊，接種到裝有液體培養基的一級搖瓶中，在25℃的恒溫搖床上140r/min振蕩培養5-6d，再將一級搖瓶中的菌液按照5%（v/v）的接種量接到裝有液體培養基的二級搖瓶中，同時在搖瓶中放1粒磁力攪拌子，在25℃的恒溫搖床上140 r/min振蕩培養3-4d，搖床培養結束后，再將搖瓶放在磁力攪拌器上，160r/min攪拌2-3h，將菌絲充分打碎，增加萌發點；

5）深層發酵培養

根據以下配方制備深層發酵培養基（按每升含有的成分計）：玉米粉20~30g，土豆汁13~19g，花生餅粉5~10g，茶枝屑6~10g，茶籽粕3.5~4.5g，甘蔗渣5~6g，蘋果渣5~6g，麩皮2.3~3.1g，磷酸二氫鉀0.8~1.5g，碳酸鈣1.1~1.3g，桑樹葉水提液4.1~4.5mL，垂盆草水提液9.4~10mL，青苔3.6~4.8g，蝦殼粉3.0~3.5g，腐植酸2.3~2.9g，硫酸鎂0.5~1.0g，煙酸 60~90mg，有機硅聚醚改性消泡劑1.6~2.0mL，余量為水，并將初始pH值調節為6.4~6.6，將深層發酵培養基倒入發酵罐中，121℃滅菌2h，滅菌后通入無菌空氣，保持正壓，淋水冷卻，待培養基溫度降至室溫時，按照8%（v/v）的接種量接入搖瓶菌種，接種采用火焰法，變量通氣發酵培養5-6d，制得液體發酵菌種。

2.根據權利要求1所述的一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，所述步驟2）中，斜面培養基的配方為每升含有以下成分：馬鈴薯180~220g，甘露醇17~23g，瓊脂16~20g，蛋白胨3~4g，蘆薈汁3~5g，核黃素 120~150mg，生物素 30~60mg，磷酸二氫鉀1.0~2.0g，硫酸鎂0.4~0.6g，檸檬酸鈦0.2~0.4g，余量為水，pH自然；斜面培養基的滅菌條件為121℃滅菌30min。

3.根據權利要求1所述的一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，所述步驟4）中，液體培養基的配方為每升含有以下成分：豆粕粉14~18g，葡萄糖26~32g，亞麻秸稈粉4.5~6.0g，橘皮粉2~3g，谷氨酰胺2~3g，磷酸二氫鉀1.0~2.0g，硫酸鎂0.4~0.6g，茶梗粉1.2~1.8g，鼠尾草汁16~22ml，煙酸130~170mg，復硝酚鈉0.22~0.26mg，余量為水，pH調節為5.8~6.2；液體培養基的滅菌條件為121℃滅菌30min。

4.根據權利要求1所述的一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，所述步驟4）中，搖瓶裝液量為每500mL搖瓶裝200mL液體培養基。

5.根據權利要求1所述的一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，所述步驟5）中，深層發酵培養基的裝料系數為65%~75%。

6.根據權利要求1所述的一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，所述步驟5）中，變量通氣是指在發酵培養的前2d通氣量為1：0.5V/V/M，后3-4d通氣量為1：1V/V/M，發酵培養的溫度為24-26℃。

7.根據權利要求1所述的一種茶樹菇菌種工廠化生產方法，其特征在于，所述步驟5）中桑樹葉水提液的制備方法為：稱取一定量的桑樹葉，切碎后加入20倍質量的純化水，先煮沸0.5h，然后保持水溫60-70℃提取2h，將汁液過濾除去固體殘渣，得桑樹葉水提液；垂盆草水提液的制備方法相同。