[發明專利]一種細胞和組織凍存保護劑及其凍存方法

在審

• 申請號: 201811353614.2
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN109287618A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 張鍵;趙華山;楊雅莉
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種組織或細胞的凍存保護劑，所述凍存保護劑包括支架材料，所述支架材料包括海藻酸鈉溶液和鈣離子溶液；所述海藻酸鈉溶液和鈣離子溶液分別獨立設置。

2.根據權利要求1所述的組織或細胞的凍存保護劑，海藻酸鈉溶液中海藻酸鈉質量濃度為0.01-10％，優選為0.1-3％，更優選為0.5％。

3.根據權利要求1所述的組織或細胞的凍存保護劑，鈣離子溶液中含鈣離子濃度為10-100mM，并配置為等滲溶液，優選的，鈣離子溶液中鈣離子濃度為50mM氯化鈣溶液。

4.根據權利要求1所述的組織或細胞的凍存保護劑，所述組織選自人體或動物體的任意組織，優選為腦組織、肌肉組織、腫瘤組織、卵巢，子宮內膜、胚胎，所述的腦組織更優選為腦皮質或海馬組織或胚胎期腦組織；

所述的細胞選自人體或動物體的任意細胞，優選為腦組織、肌肉組織、腫瘤組織、卵巢，子宮內膜、胚胎，所述的腦組織更優選為腦皮質或海馬組織或胚胎期腦組織來源的細胞。

5.一種細胞或組織的凍存方法，其包括以下步驟：

1)將待凍存的組織進行分割，分割后的組織任一邊長小于5mm的小塊；或者將細胞進行分離；或將待凍存的細胞進行分離；

2)將步驟1)獲得的分割后的組織浸泡在權利要求1-4任一項所述的凍存保護劑中；

3)將步驟2)獲得的保護后的組織放入細胞凍存液中進行凍存。

6.根據權利要求5所述的細胞或組織的凍存方法，所述步驟1)中的待凍存的組織選自人體或動物體的組織，優選為腦組織、肌肉組織、腫瘤組織、卵巢，子宮內膜，胚胎，所述腦組織更優選為腦皮質或海馬組織或胚胎期腦組織；

待凍存的細胞選自人體或動物體的細胞，優選為腦組織、肌肉組織、腫瘤組織、卵巢，子宮內膜，胚胎，所述腦組織更優選為腦皮質或海馬組織或胚胎期腦組織來源的細胞。

7.根據權利要求5所述的細胞或組織的凍存方法，步驟2)中所述的凍存保護劑分別進行浸泡，先浸泡于海藻酸鈉溶液，再置于氯化鈣溶液后，形成一層海藻酸鈉鈣交聯保護層即可。

8.根據權利要求5所述的細胞或組織的凍存方法，步驟3)中細胞凍存液中包含5％-15％的DMSO。

9.根據權利要求5所述的細胞或組織的凍存方法，步驟3)中凍存方法為進行程序性降溫后，在-80℃環境下保存12小時-24小時，然后在液氮中進行保存。

10.權利要求1-4任一項所述的細胞或組織的凍存保護劑用于細胞或組織凍存預處理或作為細胞或組織凍存預處理液中的用途。