[發(fā)明專利]一種組織和細(xì)胞凍存液及其凍存方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811353544.0
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN109329269A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張鍵;趙華山;薛麗
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種細(xì)胞或組織凍存液，其包含全神經(jīng)培養(yǎng)基，二甲基亞砜以及血清；所述全神經(jīng)培養(yǎng)基為Neurobasal培養(yǎng)基、谷氨酰胺的衍生物和細(xì)胞培養(yǎng)添加劑的組合物。

2.權(quán)利要求1所述的細(xì)胞或組織凍存液，所述谷氨酰胺的衍生物為GlutaMAX^TM，優(yōu)選為100倍稀釋。

3.權(quán)利要求1-2任一項所述的細(xì)胞或組織凍存液，所述細(xì)胞培養(yǎng)添加劑為B27。

4.權(quán)利要求1-3任一項所述的細(xì)胞或組織凍存液，各組分的比例為全神經(jīng)培養(yǎng)基60％-80％，二甲基亞砜5％-15％，血清為15％-25％，優(yōu)選為全神經(jīng)培養(yǎng)基70％，二甲基亞砜10％，血清為20％。

5.權(quán)利要求1-4任一項所述的細(xì)胞或組織凍存液，全神經(jīng)培養(yǎng)基各組分的比例為以體積計90-99％Neurobasal培養(yǎng)基、0.1-5％谷氨酰胺的衍生物和0.5-5％細(xì)胞培養(yǎng)添加劑，優(yōu)選為97％Neurobasal培養(yǎng)基、1％谷氨酰胺的衍生物和2％細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。

6.權(quán)利要求1-5任一項所述的細(xì)胞或組織凍存液，所述的血清為選自胎牛血清、馬血清、羊血清、雞血清或血清替代物。

7.一種細(xì)胞或組織凍存方法，其包括以下步驟：

1)將待凍存的組織進(jìn)行分割，分割后的組織任一邊長小于5mm的小塊；或者將細(xì)胞進(jìn)行分離；

2)將步驟1)獲得的分割后的組織先浸泡于海藻酸鈉溶液，再置于氯化鈣溶液后，形成一層海藻酸鈉鈣交聯(lián)保護(hù)層即可；

3)將步驟2)獲得的保護(hù)后的組織放入權(quán)利要求1-5任一項所述細(xì)胞或組織凍存液中進(jìn)行凍存。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其中，組織選自人體或動物體的組織，優(yōu)選為腦組織、肌肉組織、腫瘤組織、卵巢，子宮內(nèi)膜，胚胎，所述腦組織更優(yōu)選為腦皮質(zhì)或海馬組織或胚胎期腦皮質(zhì)組織；

細(xì)胞選自人體或動物體的細(xì)胞，優(yōu)選為腦細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、卵細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞，胚胎細(xì)胞，所述腦細(xì)胞更優(yōu)選為腦皮質(zhì)細(xì)胞、海馬細(xì)胞或胚胎期腦皮質(zhì)細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的細(xì)胞或組織凍存液在組織或細(xì)胞凍存中的用途；

優(yōu)選地，組織選自人體或動物體的組織，更優(yōu)選為腦組織、肌肉組織、腫瘤組織、卵巢，子宮內(nèi)膜，胚胎，所述腦組織最優(yōu)選為腦皮質(zhì)或海馬組織或胚胎期腦皮質(zhì)組織；

優(yōu)選地，細(xì)胞選自人體或動物體的細(xì)胞，更優(yōu)選為腦細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、卵細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞，胚胎細(xì)胞，所述腦細(xì)胞最優(yōu)選為腦皮質(zhì)細(xì)胞、海馬細(xì)胞或胚胎期腦皮質(zhì)細(xì)胞。