[發明專利]一種同時產五種稻曲病菌毒素的稻曲病菌的鑒定方法

在審

• 申請號: 201811351429.X
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN109355417A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 林曉燕;牟仁祥;曹趙云;曹珍珍;馬有寧;陳銘學
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6806;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所 53113
• 代理人: 錢磊

本發明涉及一種產稻曲病菌毒素的稻曲病菌的鑒定方法，尤其是一種同時產五種稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鑒定方法。通過菌落形態觀察、孢子形態鑒定、分子生物學鑒定三部分對稻曲病菌進行鑒定。上述方法，對目標菌種有效的鑒定，確定分離方法的有效性，通過三部分鑒定，鑒定的準確性非常高。

技術領域

本發明涉及一種稻曲病菌的鑒定方法，尤其是一種同時產稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鑒定方法。

背景技術

稻曲病是一種水稻真菌病害，由稻曲病菌--綠核菌屬綠核菌Ustilaginodeavirens(Cooke)Takahashi侵染水稻穗部引起。稻曲病發生較為普遍，在中國、日本、美國、印度、菲律賓等多個國家均有出現，屬于世界性水稻病害。20世紀80年代前，稻曲病僅零星分布于中晚稻田，為水稻次要病害；但隨著水稻品種、耕作方式、施肥用量及氣候環境等因素改變，近年來，稻曲病已由過去的零星分布轉變成為水稻生產中的主要病害之一。稻曲病不但在水稻穗部形成稻曲球，嚴重影響谷粒的生長，降低水稻的產量與品質，而且其病原真菌——稻綠核菌Ustilaginodea virens(Cooke)Takahashi所產生的稻曲病菌毒素對人畜具有毒害作用。目前，已逐漸引起了專家學者對稻曲病產生菌以及所產稻曲病菌毒素的廣泛關注。

稻曲病菌屬于一種寄生性較強腐生性較弱的真菌，稻曲球營養豐富，而且又暴露于自然環境中，常伴生大量的腐生細菌和真菌及其它病原菌，再加上稻綠核菌生長非常緩慢，故在培養的過程中極易受到其他病原菌的污染，因此，相對其他真菌來說，稻綠核菌的分離成功率很低。然而在實際的分離過程中，研究人員普遍發現采用稻曲球內層組織分離法可以成功分離到稻曲病菌，但其培養時間較長(培養5d后長出白色致密菌絲，菌絲生長較慢，約30d左右，顏色發生改變為淡黃色、黃色)，分離速度較慢，比較耗時。但該方法由于選用的是內部菌絲，雜菌較少，成功分離的機率較高。厚垣孢子懸液法，稻曲球經無菌水沖洗即可配制成厚垣孢子懸浮液，由于稻曲球表層伴有大量其他病原菌，它們的生長速度快于稻曲病菌的生長速度，極易污染稻曲病菌，而且生長速度過快的雜菌覆蓋于少量饅頭狀的稻曲病菌單菌落上，加大分離純化的難度。稻曲球法的缺點是多種病原菌伴生于稻曲球，在培養過程中亦可迅速生長而污染目標菌。菌核萌發法較易成功，有研究證明菌核是稻曲病菌高效分離的首選材料，但菌核形成受環境條件限制，不易收集獲取菌核；而且南方稻區少見，采用此法分離南方稻曲病菌效果并不理想。孢子振落法，由于稻曲表面不作消毒處理，稻曲表面大量的雜菌易在培養基表面快速生長，影響厚垣孢子萌發、生長及菌落的純化，同厚垣孢子懸浮液法一樣易受其他病菌污染，不易成功獲得稻曲病菌株。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種檢測精確的同時產稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鑒定方法。

本發明解決技術問題的技術方案為：一種同時產稻曲病菌毒素A、B、C、D和F的稻曲病菌的鑒定方法，其鑒定方法分為三部分：