[發明專利]一種透明質酸寡糖的制備方法

有效

• 申請號: 201811346941.5
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN109517012B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 陳玉娟;陳雯雯;杜國輝;劉建建;李德杰;穆淑娥;郭學平;欒貽宏
• 申請（專利權）人: 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07H1/06
• 分類號: C07H1/06;C07H7/033;C08B37/08;C12P19/14;C12P19/26
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 劉磊;閆桑田

1.一種高純度透明質酸寡糖的制備方法，包括：

透明質酸酶解步驟，以透明質酸酶水解透明質酸得到透明質酸寡糖混合物；

透明質酸寡糖的分離步驟，使用離子交換色譜柱對透明質酸寡糖混合物進行分離，根據出峰時間依次收集各組分；

透明質酸寡糖的脫鹽步驟，將分離后的各組分通過旋蒸濃縮，然后用尺寸排阻色譜進行脫鹽，

其中，在所述透明質酸寡糖的分離的步驟中，所述離子交換色譜柱在0～5000psi的壓力下使用，且其固定相為鍵合季銨強陰離子交換基團的硅膠固定相，所述離子交換色譜柱為Sepax HP-SAX，所述離子交換色譜柱使用的流動相為0～0.5mol/L NaCl或Na₂SO₄溶液的線性梯度洗脫，所述流動相的流速為30～60ml/min，所述流動相的運行時間為50～100min。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其還包括：

在所述透明質酸寡糖的脫鹽步驟之后，針對脫鹽后的各組分依次進行旋蒸濃縮、以及放入凍干機凍干的步驟。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其還包括：

在所述凍干步驟之后，將凍干后的各組分，依次用高效液相色譜法進行分析，用面積歸一化法測定各組分的純度的檢測步驟。

4.根據權利要求1～3任一項所述的制備方法，其中，所述透明質酸寡糖的脫鹽中使用的是尺寸排阻色譜填料是HW-40F或Sephadex G10。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其中，所述檢測步驟中使用的色譜柱為LUNA NH2柱。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其中，利用高效液相色譜法分析得到的HA4～HA20的純度在80％以上，總收率在50％以上。