[發(fā)明專利]一種諾維氏梭菌培養(yǎng)基及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811345056.5 | 申請日： | 2018-11-13 |
| 公開（公告）號： | CN109439576B | 公開（公告）日： | 2020-05-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 柴同杰;孟德志;楊玲玲 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;A61K39/08;A61P31/04;C12R1/145 |
| 代理公司： | 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240 | 代理人： | 薛鵬喜 |
| 地址： | 271018 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 諾維氏梭菌 培養(yǎng)基 及其 制備 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種諾維氏梭菌培養(yǎng)基及其制備方法，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血紅素溶液和維生素K1溶液按體積比1000ml：(8?12)ml：(4?6)ml配制而成；每1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中包含：胰蛋白胨8?12g、酵母浸粉8?12g、磷酸鉀4?6g、葡萄糖8?12g、糊精0.5?1.5g、牛肉粒7?15g。本發(fā)明的諾維氏梭菌培養(yǎng)基能夠適合和滿足諾維氏梭菌的生長需求，極大提高了諾維氏梭菌的生長及繁殖速度，有利于諾維氏梭菌的研究及其疫病防控。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及厭氧生物培養(yǎng)基制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種諾維氏梭菌培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)
諾維氏梭菌能引起人的氣性壞疽、動物的惡性水腫、綿羊的大頭病和綿羊、山羊、牛、馬等的黑疫等疾病，發(fā)病急、死亡率高，是人畜共患病中危害較大的一類病原微生物，是嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的重要疾病之一，給畜牧業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。
但由于諾維氏梭菌屬于厭氧菌，其厭氧培養(yǎng)及篩選培養(yǎng)基的技術(shù)困難，目前尚未有諾維氏梭菌的專用培養(yǎng)基。各類文獻(xiàn)中提及的培養(yǎng)基，如庖肉培養(yǎng)基、PYG液體培養(yǎng)基、厭氣肉肝湯培養(yǎng)基、腦心浸出液肉湯(BHI)培養(yǎng)基等，在諾維氏梭菌培養(yǎng)過程中效果不穩(wěn)定，總體培養(yǎng)效果較差，細(xì)菌生長繁殖速度慢，往往達(dá)不到理想的細(xì)菌密度或含量。因此，在進(jìn)行諾維氏梭菌的檢驗、試驗和疫苗生產(chǎn)當(dāng)中，達(dá)不到相應(yīng)的目標(biāo)。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種諾維氏梭菌培養(yǎng)基及其制備方法。本發(fā)明的培養(yǎng)基能夠適合和滿足諾維氏梭菌的生長需求，極大提高了諾維氏梭菌的生長及繁殖速度，有利于諾維氏梭菌的研究及其疫病防控。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
本發(fā)明的第一方面，提供一種諾維氏梭菌培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血紅素溶液和維生素K1溶液按體積比1000ml：(8-12)ml：(4-6)ml配制而成；
每1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中包含：胰蛋白胨8-12g、酵母浸粉8-12g、磷酸鉀4-6g、葡萄糖8-12g、糊精0.5-1.5g、牛肉粒7-15g。
優(yōu)選的，所述諾維氏梭菌培養(yǎng)基，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血紅素溶液和維生素K1溶液按體積比1000ml：10ml：5ml配制而成；
每1000ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中包含：胰蛋白胨10g、酵母浸粉10g、磷酸鉀5g、葡萄糖10g、糊精1g、牛肉粒12g。
優(yōu)選的，所述血紅素溶液由如下方法制備而成：
將1g維生素K1溶于99ml無水乙醇中，過濾除菌。
優(yōu)選的，所述維生素K1溶液由如下方法制備而成：
將0.5g血紅素溶于1mol/L的氫氧化鈉1mL中，加蒸餾水至100mL，滅菌。
進(jìn)一步的，所述諾維氏梭菌培養(yǎng)基的pH為7.8-8.4。
本發(fā)明的第二方面，提供上述諾維氏梭菌培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：
(1)將胰蛋白胨、酵母浸粉、磷酸鉀、葡萄糖、糊精和牛肉粒溶解于蒸餾水中，高溫滅菌，配制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
(2)將基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至室溫，然后向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血紅素溶液和維生素K1溶液，即制備得到諾維氏梭菌培養(yǎng)基。
優(yōu)選的，步驟(1)中，所述蒸餾水為雙蒸餾水。
本發(fā)明的第三方面，提供上述諾維氏梭菌培養(yǎng)基在諾維氏梭菌快速増菌培養(yǎng)中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第四方面，提供上述諾維氏梭菌培養(yǎng)基在制備諾維氏梭菌疫苗中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第五方面，提供一種諾維氏梭菌的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
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