[發明專利]一種塞內卡病毒的純化濃縮方法

在審

• 申請號: 201811344603.8
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN111172121A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 陳光達;陳九連;田志輝;劉國英;張燕紅;史琳凱;路榮;齊志濤;泰鵬
• 申請（專利權）人: 金宇保靈生物藥品有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 郭凡;魯兵

本發明公開了一種塞內卡病毒的濃縮方法，包括塞內卡病毒液預處理，及預處理后的濃縮；所述濃縮依次經過過濾濃縮、洗濾、過濾濃縮。本發明涉及一種可適用于大規模工業化生產的SVV抗原濃縮純化方法。該方法采用切向流過濾及洗濾相結合的方式對SVV抗原進行濃縮純化，具有操作方便，易于放大，過程溫和、穩定，抗原回收率高等特點。該方法可用于活病毒和滅活病毒的濃縮純化，抗原回收率80％，蛋白去除率90％，可制備出純化SVV抗原或為后續抗原進一步精細純化提供原料。

技術領域

本發明涉及制備病毒疫苗的技術領域，特別是涉及一種塞內卡病毒的純化濃縮方法。

背景技術

塞內卡病毒(Seneca Valley virus，SVV)，又叫做Seneca virus A(SVA)，是無囊膜的單股正鏈RNA病毒，是小RNA病毒科(Picornaviridae)塞內卡病毒屬(Sene-cavirus)的唯一成員，是近年來新發現的一種能引起豬水泡樣癥狀的病毒，被認為是引起豬原發性水皰病(PIVD)的主要原因。該病毒感染動物(尤其是豬)后,可引起繁殖母豬和公豬的鼻吻、冠狀帶和蹄部出現水皰性病變，偶見腹瀉癥狀，成年豬感染通常呈亞臨床感染。更可怕的是，該病毒會引起新生仔豬的死亡，1-3日齡新生仔豬病死率可達30％-70％。豬被該病毒感染后，在臨床上其發病癥狀與口蹄疫、豬水皰病和豬水泡性口炎很難區分，往往會因診斷不及時而耽誤治療。

自20世紀80年代后期以來，美國豬群中便存在SVV。自2002年確定SVV病毒存在至2015年初，SVV感染的豬病例只有在美國和加拿大零星發生。但自2015年下半年后，在巴西、美國、加拿大、中國、哥倫比亞等多國相繼發生了SVV感染的疫情，并且呈蔓延之勢。截至2015年9月底,美國已有11個州確診豬SVV感染病例,加拿大、意大利和巴西出現疑似SVV感染病例。

豬SVV作為近兩年在全球多地出現的一種跨境動物疾病病毒，已經對多國養殖業造成了不同程度的影響。特別是隨著規模化養豬的不斷發展和強毒株的出現，豬塞內卡病毒感染和流行日趨嚴重。我國作為養豬大國，生豬養殖總量約為全球50％，因此，有必要對SVV流行態勢密切關注并盡快建立全方位的應對措施。目前，我國對SVV的報道并不多，大多養殖戶對該病沒有引起足夠的重視，目前尚無針對豬塞內卡病毒感染的有效治療藥物及疫苗，主要依靠隔離感染豬群、淘汰隱性感染動物控制豬塞內卡病毒的蔓延。但該病已經形成全球蔓延的趨勢，一旦大規模爆發，勢必會造不可估量的經濟損失。

因此，研制該病毒的疫苗是預防該病毒大規模蔓延的最主要途徑之一。為獲得高抗原含量的疫苗，從而發揮更強的預防功效，病毒疫苗的制備過程中關鍵環節之一為病毒的純化和濃縮，因此，需要尋找一種有效的方法對塞內卡病毒進行純化和濃縮。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中存在的技術缺陷，提供一種快速提純及濃縮塞內卡病毒的方法，包括塞內卡病毒液預處理，及預處理后的濃縮；所述濃縮依次經過病毒液過濾濃縮、洗濾、殘留病毒液過濾濃縮。

所述塞內卡病毒液預處理是將塞內卡病毒液(弱毒或強毒)在10000-12000rpm/min下離心20-30min，上清即為病毒液。

所述塞內卡病毒液預處理是將塞內卡病毒液(弱毒或強毒)經筒式過濾器或深層濾膜(0.2μm≤濾膜孔徑≤0.65μm)過濾澄清，得到的濾出液即為病毒液。

所述濃縮是按所需濃縮倍數將預處理后的病毒液用中空纖維濃縮系統或超濾膜包系統進行切向流過濾濃縮，使用PBS溶液進行洗濾，使用PBS溶液流經所述系統收集殘留病毒液，從所述系統透過端合并收集的病毒液即為塞內卡病毒濃縮液。

所述系統孔徑為400-750Kd。

所述系統的透過端流速為2-4L/min。

所述系統的進口壓力≤0.1MPa，跨膜壓差≤0.1MPa。