[發明專利]一種塞內卡病毒的純化濃縮方法

在審

• 申請號: 201811344603.8
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN111172121A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 陳光達;陳九連;田志輝;劉國英;張燕紅;史琳凱;路榮;齊志濤;泰鵬
• 申請（專利權）人: 金宇保靈生物藥品有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 郭凡;魯兵

1.一種塞內卡病毒的純化濃縮方法，其特征在于，包括塞內卡病毒液預處理，及預處理后的濃縮；所述濃縮依次經過病毒液過濾濃縮、洗濾、殘留病毒液過濾濃縮。

2.根據權利要求1所述純化濃縮方法，其特征在于，所述塞內卡病毒液預處理是將塞內卡病毒液(弱毒或強毒)在10000-12000rpm/min下離心20-30min，上清即為病毒液。

3.根據權利要求1所述純化濃縮方法，其特征在于，所述塞內卡病毒液預處理是將塞內卡病毒液(弱毒或強毒)經筒式過濾器或深層濾膜(0.2μm≤濾膜孔徑≤0.65μm)過濾澄清，得到的濾出液即為病毒液。

4.根據權利要求2或3所述純化濃縮方法，其特征在于，所述濃縮是按所需濃縮倍數將預處理后的病毒液用中空纖維濃縮系統或超濾膜包系統進行切向流過濾濃縮，使用PBS溶液進行洗濾，使用PBS溶液流經所述系統收集殘留病毒液，從所述系統透過端合并收集的病毒液即為塞內卡病毒濃縮液。

5.根據權利要求4所述純化濃縮方法，其特征在于，所述系統孔徑為400-750Kd。

6.根據權利要求4或5所述純化濃縮方法，其特征在于，所述系統的透過端流速為2-4L/min。

7.根據權利要求4-6任一所述純化濃縮方法，其特征在于，所述系統的進口壓力≤0.1MPa，跨膜壓差≤0.1MPa。

8.根據權利要求4-7任一所述純化濃縮方法，其特征在于，洗濾過程中PBS溶液的濃度為40mmol/L，pH＝7.5-7.6，流速為2-4L/min。

9.根據權利要求1-8任一所述純化濃縮方法，其特征在于，濃縮倍數為10倍以上，單次處理塞內卡病毒液100L以上，優選200L-600L。

10.根據權利要求1-9任一所述純化濃縮方法，其特征在于，所述中空纖維濃縮系統或超濾膜包系統在使用前包括除菌平衡、完整性檢測；

優選的，所述除菌平衡是用NaOH溶液循環清洗中空纖維濃縮系統或超濾膜包系統30-60min，清洗后將中空纖維或超濾膜包在NaOH溶液中浸泡過夜，完成除菌平衡；

優選的，所述完整性檢測是先將除菌平衡后的中空纖維濃縮系統或超濾膜包系統用純化水清洗至洗出液的pH值≤7.0，再向所述系統施加0.08-0.1MPa壓力的潔凈壓縮空氣，若1min內無持續氣泡逸出，說明完整性合格，備用；最后用PBS溶液(pH＝7.5-7.6)清洗完整性合格的所述系統至洗出液的pH值≤7.5，備用；

優選的，所述中空纖維濃縮系統或超濾膜包系統在使用之后包括原位消毒，具體為：用0.5mol/L的NaOH溶液循環清洗所述系統30min，清洗后將中空纖維或超濾膜包在NaOH溶液中浸泡保存。