[發明專利]一種β-內酰胺類藥物受體蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201811340729.8
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109336954B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 楊春江;趙榮茂;宋輝;莫勛;魏佳玥;袁志波;吳迪;邰宗洋
• 申請（專利權）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 馮建基;孫進華

本發明實施例公開了一種β?內酰胺類藥物受體蛋白及其應用，該受體蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本發明上述受體蛋白即能夠與青霉素類藥物特異性結合也能夠與頭孢菌素類藥物特異性結合，并具有較高的特異性。

技術領域

本發明涉及β-內酰胺類藥物檢測技術領域，具體涉及一種β-內酰胺類藥物受體蛋白及其應用。

背景技術

乳及其制品已經成為重要動物源性食品，泌乳動物如奶牛、奶山羊等會因各種原因導致乳房炎的發生。其中由鏈球菌和金黃色葡萄球菌引起的細菌性乳房炎已成為乳房炎的主要原因之一。獸醫臨床上常采用青霉素類、頭孢菌素類等β-內酰胺類藥物治療，最終在乳汁中產生藥物殘留，而藥物殘留超標可能引起潛在健康風險。

目前，對β-內酰胺類藥物的檢測主要有儀器分析方法和微生物生長抑制法以及免疫檢測法等，乳品生產企業、奶站和基層檢測實驗室采用的是低成本、靈敏快速的免疫學檢測方法，其中以膠體金免疫層析檢測試紙條和酶聯免疫檢測試劑盒為主；免疫學方法核心原理是借助能與β-內酰胺類藥物的母核結構β-內酰胺環特異性結合的抗體、青霉素結合蛋白或者青霉素類藥物受體，對此類藥物進行廣譜性的檢測分析。

由于β-內酰胺類藥物發展非常迅速，從最初的青霉素已經發展到第四代頭孢類藥物，藥物分子結構在母核結構的基礎上越來越復雜，傳統的基于識別母核結構的免疫學檢測分析方法已經難以滿足目前世界各國MRL的要求。特別是常規的母核結構識別分子(即特異性抗體、結合蛋白或受體蛋白)具有片面性，對青霉素類藥物(例如青霉素G、氨芐青霉素、臨氯青霉素和阿莫西林)敏感的分子，而對頭孢菌素類(例如頭孢噻呋、頭孢喹肟和頭孢洛寧)不敏感；而對頭孢類藥物敏感的識別性分子，對青霉素類敏感性又較差。

發明內容

本發明實施例的第一目的在于提供一種β-內酰胺類藥物受體蛋白，該受體蛋白即能夠與青霉素類藥物特異性結合也能夠與頭孢菌素類藥物特異性結合，并具有較高的特異性。

本發明實施例的第二目的在于提供一種β-內酰胺類藥物受體蛋白在β-內酰胺類藥物檢測試劑盒以及膠體金檢測試紙條中的應用，該應用操作簡單，靈敏度高，而且能夠快速準確的檢測樣本中的β-內酰胺類藥物；并且實現了對樣品的現場檢測。

為實現上述目的，本發明實施例提供一種β-內酰胺類藥物受體蛋白，所述受體蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

進一步地，所述受體蛋白氨基酸序列選自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：4中的任意一種。

在本發明中對所述受體蛋白的制備方法不做嚴格限制，例如，可以通過人工合成的方法制備得到，也可以通過生物信息學手段根據氨基酸序列篩選得到相對應的基因序列，例如，篩選得到與氨基酸序列SEQ ID NO：1相對應的基因序列如SEQ ID NO：5所示；與氨基酸序列SEQ ID NO：2相對應的基因序列如SEQ ID NO：6所示；與氨基酸序列SEQ ID NO：3相對應的基因序列如SEQ ID NO：7所示；與氨基酸序列SEQ ID NO：4相對應的基因序列如SEQ ID NO：8所示；并通過基因序列表達得到對應氨基酸序列的受體蛋白。

本發明另一實施例提供一種β-內酰胺類藥物檢測試劑盒，所述試劑盒包括盒體、設置在盒體內可拆卸的酶標板和試劑，所述酶標板的每個孔包被有所述受體蛋白；所述試劑包括酶標記的氨芐青霉素、標準溶液、顯色液、終止液、洗滌液和樣本稀釋液。

優選地，所述酶標記的氨芐青霉素為辣根過氧化物酶標記的氨芐青霉素；更優選地，所述辣根過氧化物酶標記的氨芐青霉素通過如下制備方法制備得到：

(1)將氨芐青霉素溶于磷酸鹽緩沖液中，隨后，將N-羥基琥珀酰亞胺和二環己基碳二亞胺置入氨芐青霉素溶液中進行反應；