[發明專利]一種β-內酰胺類藥物受體蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201811340729.8
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109336954B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 楊春江;趙榮茂;宋輝;莫勛;魏佳玥;袁志波;吳迪;邰宗洋
• 申請（專利權）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 馮建基;孫進華

1.一種β-內酰胺類藥物受體蛋白，其特征在于，所述受體蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

2.一種β-內酰胺類藥物檢測試劑盒，所述試劑盒包括盒體、設置在盒體內可拆卸的酶標板和試劑，其特征在于，所述酶標板的每個孔包被有權利要求1所述的受體蛋白；所述試劑包括酶標記的氨芐青霉素、標準溶液、顯色液、終止液、洗滌液和樣本稀釋液。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標板通過如下制備方法制備得到：

將所述受體蛋白采用碳酸鹽緩沖液稀釋至0.5-2μg/ml，并向酶標板的每孔中添加90-110μL所述受體蛋白稀釋液，在4℃條件下孵育過夜；隨后，將所述受體蛋白稀釋液甩干，并以磷酸鹽吐溫緩沖液洗板2-4次，再將封閉液添加到酶標板中，在35-39℃條件下孵育1.5-2.5h，再將封閉液甩干即得所述酶標板。

4.一種β-內酰胺類藥物檢測試劑盒，所述試劑盒包括盒體、設置在盒體內可拆卸的酶標板和試劑，其特征在于，所述酶標板的每個孔包被有氨芐青霉素偶聯抗原；所述試劑包括酶標記的權利要求1所述的受體蛋白、標準溶液、顯色液、終止液、洗滌液和樣本稀釋液。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標記的所述受體蛋白為辣根過氧化物酶標記的所述受體蛋白；所述辣根過氧化物酶標記的所述受體蛋白由包括如下步驟制備得到：

(1)將辣根過氧化物酶溶于1％-1.5％戊二醛溶液中室溫靜置過夜；

(2)將過夜溶液進行洗脫，收集棕色洗脫液、濃縮，緩慢攪拌；

(3)將所述受體蛋白稀釋至2-3mg/ml，在攪拌條件下，將所述受體蛋白溶液逐滴加入到濃縮液中得到混合溶液；

(4)向混合溶液中添加碳酸緩沖液，并繼續攪拌一段時間，隨后，添加賴氨酸溶液并靜置；

(5)在攪拌條件下，向靜置后的混合溶液中逐滴加入等體積飽和硫酸銨進行反應；

(6)反應結束后，離心收集沉淀物并清洗，再將沉淀物溶于PBS緩沖液、透析、離心收集上清液即得辣根過氧化物酶標記的所述受體蛋白。

6.一種β-內酰胺類藥物膠體金檢測試紙條，所述檢測試紙條包括PVC背板、硝酸纖維素膜、樣品墊和吸水墊，其特征在于，所述檢測試紙條還包括微孔試劑，所述微孔試劑為含有膠體金標記的權利要求1所述的受體蛋白的塑料微孔；所述硝酸纖維素膜上的檢測線采用氨芐青霉素偶聯抗原進行制備，質控線采用鼠抗His標簽抗體進行制備。

7.根據權利要求6所述的膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述微孔試劑由包括如下步驟制備得到：

(1)將膠體金標記的所述受體蛋白進行稀釋，再將膠體金標記的所述受體蛋白溶液添加到酶標板中進行包被；

(2)棄去酶標板孔中的包被液，并進行洗板、拍干，隨后，向酶標板孔中添加明膠溶液進行封閉；

(3)棄去酶標板孔中的明膠溶液，并進行洗板、拍干、真空干燥即得所述微孔試劑。

8.根據權利要求7所述的膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述膠體金標記的所述受體蛋白由包括如下步驟制備得到：

(1)在膠體金溶液中添加碳酸鉀溶液；

(2)將所述受體蛋白溶液添加到膠體金溶液中，室溫孵育；隨后，向孵育后的溶液中添加牛血清白蛋白、混勻，離心收集沉淀物；

(3)采用磷酸鹽緩沖液復溶沉淀物，即得膠體金標記的所述受體蛋白。